基本方案
| 實驗方法原理 |
β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶,β-呋喃糖苷酶,轉化酶,蔗糖酶。 此酶水解 β-D-呋喃果糖苷中 β-D-呋喃果糖苷殘基的非還原端,特別是蔗糖。這是早期生化研究中最熱領域之一,Michaelis-Menten 等式就是來自于轉化酶的反應。實驗利用當蔗糖被切成葡萄糖和果糖的等克分子混合物時,平面偏振光的偏差發生倒轉(轉化酶)。這個反應可以用偏振儀連續記錄,實驗是 10 ml 樣品在 10 ml 比色皿中測得的,若使用其他比色皿可能發生改變。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 轉化酶 |
| 試劑、試劑盒 | 乙酸緩沖液 D-(+)蔗糖 碳酸鈉 |
| 儀器、耗材 | 分光光度計 |
| 實驗步驟 |
實驗所需「試劑」具體見「其他」 實驗混合物: 恢復到 30 ℃ 0.1 ml 轉化酶 培養一段時間(1~10 min),并加入 6 ml 1mol/L Na2CO3 在 10 cm 的偏振儀比色皿中測其偏振性 每分鐘分解 1 umol 的底物為 1 U 酶。
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| 注意事項 | |
| 其他 |
試劑: 0.05 mol/L 乙酸緩沖液,pH 4.62(2.85 ml 乙酸,100%,Mr=60,溶于 800 ml H2O,用 1 mol/L NaOH 調至 pH 4.62,補充到 1 L) 0.3 mol/L D-(+)蔗糖(Mr=342.3;10.3 g 溶于 100 ml H2O) 1 mol/L 碳酸鈉(Na2CO3·10 H2O,Mr=286.1;28.6 g 溶于 100 ml H2O) 從酵母中提取的轉化酶(約 300 U/mg)
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