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  • 發布時間:2019-09-10 11:29 原文鏈接: λ噬菌體噬菌斑的挑取實驗

               

    實驗方法原理 遺傳上同源的 λ 噬菌體原種是通過 "挑取” 一個完全獨立的噬菌斑并將含有裂解物的瓊脂/瓊脂糖保存于貯存液中而獲得的。獲得的原種可用于制備噬菌體的平板裂解物或液體培養物,也可用于以后的分析。
    實驗材料

    λ 噬菌體

    試劑、試劑盒

    氯仿 SM

    儀器、耗材

    硼硅酸鹽巴斯德設管(配有橡皮球)或微量移液器 微量離心管或聚丙烯離心管

    實驗步驟

    一、材料

    1. 緩沖液和溶液

    氯仿

    SM

    2. 專用設備

    硼硅酸鹽巴斯德設管(配有橡皮球)或微量移液器

    微量離心管或聚丙烯離心管(13 mm X 100 mm)

    3. 載體和菌株

    λ 噬菌體,在菌苔上形成完全獨立的噬菌斑。

    二、方法

    1. 在微量離心管或聚丙烯離心管中加入 1 ml SM,再滴入一滴(約 50 μl)氯仿。

    用聚丙烯離心管是因為它們抗氯仿。

    2. 用一個帶有橡皮球的硼硅酸鹽巴斯德吸管或微量移液器,刺穿所選擇的 λ 噬菌體噬菌斑直到下層的硬瓊脂,輕輕一吸,將噬菌斑和下層瓊脂一起吸入吸管中。

    另外,也可用滅苗的 8 cm 長的木質簽(又稱挑苗簽或棉簽)或牙簽輕輕接觸所要挑選的噬菌斑中央的頂層瓊脂/瓊脂糖的表面來挑取噬苗斑,立即將簽放入 SM/氯仿中,渦旋振蕩使含噬菌體的瓊脂/瓊脂糖脫落。

    3. 從硼硅酸鹽巴斯德吸管中洗下瓊脂塊,置于含 SM/氯仿(在步驟 1 中制備)的試管中,將試管蓋上帽于室溫放置 1~2 h,使噬菌體顆粒從瓊脂塊中脫落下來。為幫助洗脫,可將試管放于搖床上輕輕轉動。最后,將噬菌體懸浮液置 4℃ 保存。

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