λ噬菌體的載體表達實驗

表達載體

SDS LB

培養箱 分光光度計 離心機

1.  將表達載體轉化攜有溫度敏感突變的抑制基因的大腸桿菌溶源菌。轉化物涂布于LB/抗生素平皿上，32℃下溫育。

2.  于抗生素培養基中，32℃培養轉化菌。

3.  以≥1：20的比例將過夜培養物稀釋往新鮮的LB/抗生素培養基中，在32℃以250~300 r/min 轉速振蕩培養直至OD₆₅₀=0.6~0.8。 

4.  在搖動下，加1/3體積的65℃LB/抗生素培養基，迅速將培養物的溫度提高到42℃，在42℃繼續培養2~3 h。

5.  取出1 ml 液體做分析用，余下的于4℃經3 000 g（低速轉子）離心15 min，細胞沉淀在-70 0℃凍結保存以備分離基因表達產物所用。

6.  以最大速度離心1 ml 培養物，沉淀重懸于50 μl SDS樣品緩沖液中，煮沸5~10 min，進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析基因表達產物。