pSKF是利用了λ噬菌體的調節信號的pBR222衍生質粒。λ噬菌體阻遏蛋白cI 可完全抑制PL。啟動子的轉錄，使得含PL啟動子的質粒可穩定存在于宿主菌中。
| 實驗材料 | 表達載體 |
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| 試劑、試劑盒 | SDSLB |
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| 儀器、耗材 | 培養箱分光光度計離心機 |
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| 實驗步驟 | 1. 將表達載體轉化攜有溫度敏感突變的抑制基因的大腸桿菌溶源菌。轉化物涂布于LB/抗生素平皿上，32℃下溫育。
2. 于抗生素培養基中，32℃培養轉化菌。
3. 以≥1：20的比例將過夜培養物稀釋往新鮮的LB/抗生素培養基中，在32℃以250~300 r/min 轉速振蕩培養直至OD650=0.6~0.8。
4. 在搖動下，加1/3體積的65℃LB/抗生素培養基，迅速將培養物的溫度提高到42℃，在42℃繼續培養2~3 h。
5. 取出1 ml 液體做分析用，余下的于4℃經3 000 g（低速轉子）離心15 min，細胞沉淀在-70 0℃凍結保存以備分離基因表達產物所用。
6. 以最大速度離心1 ml 培養物，沉淀重懸于50 μl SDS樣品緩沖液中，煮沸5~10 min，進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析基因表達產物。 展開 |
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