《中國藥典》2025年版一部大青葉公示稿修訂梳理及研究思路解析

發布時間：2024-07-20 00:00 原文鏈接：《中國藥典》2025年版一部大青葉公示稿修訂梳理及研究思路解析

大青葉（Isatidis folium）是我國傳統中藥，為十字花科植物菘藍的干燥葉，具有清熱解毒、涼血消斑的功效，廣泛應用于病毒性流行感冒、流行性腮腺炎等感染性疾病。

標準修訂概況

2024年6月，國家藥典委發布修訂公示稿，主要修訂點如下：

1、藥材修訂了薄層鑒別項目，在靛玉紅、靛藍鑒別基礎上，增加對照藥材鑒別項目

2、增加了雜質檢查項目

3、藥材修訂了含量測定項目，在靛玉紅項目基礎上，增加靛藍含量測定項目，建立兩個化合物同時測定方法，優化供試品溶液制備流程

4、同時修訂飲片標準，包含雜質和含量測定

為全面了解標準修訂情況，島津技術團隊與起草單位河北省藥品醫療器械檢驗研究院做了詳細了解，供中藥行業相關單位參考。

標準修訂背景

? 現行版藥典大青葉標準及中成藥標準概況

靛藍、靛玉紅是目前大青葉及其制劑關注度較高的質控指標，目前藥典藥材含量測定僅收載靛玉紅項目測定方法。藥典共收載27 個含大青葉的中成藥，19個靛藍或靛玉紅的薄層鑒別項，均未設置大青葉含量測定項。

? 現行版藥典大青葉標準含量測定方法及標準修訂難點

靛玉紅采用三氯甲烷索氏提取、高效液相色譜法測定。但靛藍在三氯甲烷中解度差，且對光和熱存在一定程度的不穩定性，若仍采用原方法，將造成提取不完全或分解、對照品難以配制等問題，影響含量測定準確性。

? 標準立項目的

優化《中國藥典》大青葉質量標準含量測定的指標及方法，解決大青葉原標準含量測定指標成分單一、方法繁瑣等問題，提高大青葉供試品溶液中靛藍、靛玉紅的提取率及穩定性，優化大青葉藥材及飲片的質量控制方法，同時為大青葉中成藥含量測定方法的建立提供技術支撐。

標準修訂主要工作簡介

? 起草使用儀器和色譜柱

? 方法優化-方法初選

提取溶劑的選擇：根據靛藍、靛玉紅溶解性及實際實驗效果，在三氯甲烷、甲醇、DMF等多種溶劑中進行考察，最終顯示DMF對二者均有良好的溶解性，但供試品溶液在測定過程中呈現較差的穩定性。針對靛藍、靛玉紅在中性、堿性溶液中不穩定的性質，最終確定使用含磷酸的DMF 溶液作為提取溶劑，結果顯示溶解度、穩定性均良好。

提取方式的選擇：當用加熱回流的?式進行提取時，靛藍已檢測不到；當用 100℃熱浸時，靛藍含量也有不同程度的減少；當用超聲提取時，靛藍亦有分解。最終確定采用振搖提取，該法提取率高且穩定性好。

? 提取條件的單因素考察

磷酸體積分數：各因素對含量的影響作性原則，權衡高效和普適，為避免高濃度磷酸溶液的低pH 值對色譜系統的影響，以近平緩的5% 磷酸體積分數為理想試驗區域。

振搖時間：靛藍、靛玉紅具有不同程度的光不穩定性，為避免影響實驗結果，并考慮到方法的經濟性，以40 min振搖時間為理想試驗區域。

料液比：兩個成分含量隨液料比的變化趨勢一致，在（20∶1）～（80∶1） mL·g–1范圍內，含量呈上升趨勢，在50∶1 mL·g–1時趨于平緩。

? Box-Behnken 響應面法優化提取方法

各因素交互作用對含量影響的響應面圖和等高線圖

通過軟件優化得到實驗條件下的最佳工藝條件及預測的結果，即最佳提取大青葉中靛藍、靛玉紅的方法為：磷酸體積分數5. 345%，振搖時間40 min，液料比50∶1 mL·g–1，靛藍、靛玉紅含量預測值分別為746. 659、392. 032 μg·g–1。實際操作確定方法為磷酸體積分數5%，振搖時間40 min，液料比50∶1 mL·g–1，進行驗證試驗，得到靛藍、靛玉紅含量平均值為735. 517、399. 123 μg·g–1，與預測值的RSD 為0. 8%、0. 9%，驗證建立的回歸模型可靠，優化的方法實際可行。

? 方法學考察典型圖譜