此法是組織相容性抗原(HLA)檢查技術中最常用的一種方法.也稱微量淋巴細胞毒試驗.人體的組織相容性抗原存在于淋巴細胞膜的表面,從供者與受者的血液分離淋巴細胞作為靶細胞,以各種定型單價抗血清與家兔血清補體作為效應系統.如果淋巴細胞表面具有與抗血清相對應的抗原,則淋巴細胞就會受損傷或致死而被臺盼藍染色.
1、 材料:
a.淋巴細胞
b. 血清.小牛血清(56℃滅活30min)
c.待測血清.收集多產婦分娩時的胎盤剝離后的血,分出血清,疊氮納防腐,4℃保存.
d.已知陽性對照血清.用上海市中心血站制備的馬抗人淋巴細胞血清(ALS),同時做1:3稀釋.
e.補體.新鮮家兔混合血清,分裝小試管,保存于-20℃.
2、 操作步驟:
a.在塑料試驗盒內加入醫用液體石蠟油20ml,放進一塊52孔微量玻璃試驗班,使板沉至盒底.
b.用0.25ml的微量定量加液器分別加入待測血清和陽性對照血清2-2ul/孔,陰性對照用Hanks液代之.加樣針尖應磨平.
c.用同法每孔內加入待測的淋巴細胞2-3ul,應先加陰性對照和補體對照孔,然后加待測孔,最后加陽性血清對照孔,加后輕搖使其混勻,置室溫作用1h.
d.每孔加入兔補體5-7ul(按加淋巴細胞順序加入),置37℃培育45min(或室溫作用1h).
e.每孔加入2%臺盼藍等滲液3-5ul室溫中靜置20min,吸去藍色上清.
f.普通顯微鏡檢查,記錄每孔中死細胞(著色細胞)數.
死細胞.體積稍大,著藍色,無折光性.
活細胞.大小正常,未著色,較透亮.
判斷標準(每次實驗,需做3-6個復本).
其中著色細胞:《=20%為陰性, 20%--50%為弱陽性, 50%--70%為陽性, 》=70%為強陽性.