一步法和兩步法RTPCR的根本區別

常見，在使用一個樣品檢測多個mrna時比較有用。然而一步法rt-pcr具有其他優點。一步法rt-pcr在處理大量樣品時易于操作，有助于減少殘余污
染，因為在cdna合成和擴增之間不需要打開管蓋。一步法可以得到更高的靈敏度，最低可以達到0.1pg總rna，這是因為整個cdna樣品都被擴增。
對于成功的一步法rt-pcr，
一般使用反義的基因特異性引物起始cdna合成。
一步法
兩步法
起始第一鏈cdna合成使用：
起始第一鏈合成使用
oligo(dt)
gsp引物
隨機六聚體
gsp引物
優點
優點
靈活
方便
引物選擇
擴增酶同逆轉錄酶預先混合
擴增酶的選擇
轉管步驟少，減少污染可能性
困難rt-pcr的優化能力
高靈敏度
同
platinum酶結合提高特異性
適用于大量樣品分析
同platinumpfxtaqdna聚合酶結合提高忠實性
適用于定量pcr
適用于在單個樣品中檢測幾個mrna