三黃片的鑒別及含量測定

　　鑒別方法

　　(1)取本品，置顯微鏡下觀察：草酸鈣簇晶多破碎，直徑20～140μm。

　　(2)取本品5片,除去糖衣，研細，加甲醇30ml，加熱回流提取30分鐘，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥＢ)試驗,吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯－丁酮－甲酸－水(10:7:1:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的黃色熒光斑點。

　　(3)取[鑒別](2)項下的供試品溶液5ml，蒸干，殘渣加水15ml攪拌使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調節PH值至1～2，用醋酸乙酯提取2次，每次10ml，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥＢ)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5：3：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

　　(4)取[鑒別](2)項下的供試品溶液5ml，蒸干，殘渣加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，置熱水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次10ml，合并乙醚提取液，揮去乙醚，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃酚、大黃素對照品，加甲醇制成每1mg中各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出,晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的5個橙黃色熒光主斑點，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點變為紅色。

　　 [鑒別](2)項下的供試品色譜，置紫外光燈(365nm)下檢視，在鹽酸小檗堿所顯斑點的上方位置，不得顯持久的藍紫色熒光斑點。其他應符合片劑項下有關的各項規定。[2]

　　含量測定

　　照高效液相色譜法測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.1%磷酸溶（85：15）為流動相；檢測波長為254nm。理論板數按大黃素峰計算應不低于2000。 對照品溶液的制備分別精密稱取大黃素和大黃酚對照品適量，加無水乙醇-醋酸乙酯（2：1）制成每1ml含大黃素0.01mg、大黃酚0.025mg的混合溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細（過三號篩），精密稱取適量（約相當于1片的重量），置錐形瓶中，精密加乙醇25ml，密塞，稱定重量，置水浴上加熱回流1小時，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過，精密量取續濾液10ml，置燒瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10：1）溶液15ml，置水浴中加熱水解1小時，立即冷卻，用氯仿強力振搖提取4天，每次15ml，合并氯仿液，置水浴上蒸干，殘渣用無水乙醇-醋酸乙酯（2：1）溶解，移置25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。[3]