上海藥物所表觀遺傳分子機制合作研究取得新進展

　　中科院上海藥物研究所蔣華良課題組與美國芝加哥大學化學系何川課題組合作，針對胸腺嘧啶DNA糖苷化酶及細菌轉錄因子AgrA在表觀遺傳與轉錄調控中的作用開展研究，取得了良好進展。研究論文分別于2012年2月及2012年5月在線發表在Nature Chemical Biology和PNAS上。

　　在針對胸腺嘧啶DNA糖苷酶（Thymine-DNA glycosylase， TDG）底物選擇性機制的研究中，兩個課題組研究人員綜合運用化學生物學、理論模擬等手段，闡明了TDG選擇性切除DNA分子中被修飾的嘧啶堿基的分子機制。TDG能選擇性剪切由TET蛋白催化5-甲基胞嘧啶（5mC）氧化產生的5-醛基胞嘧啶（5fC）及5-羧基胞嘧啶（5caC），繼而啟動下游DNA剪切修復（BER，base-excision repair）通路，將5mC還原成未修飾的胞嘧啶。然而，TDG如何在眾多正常的胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶中選擇性切除5caC和5fC的機制并不明確。

　　何川教授課題組通過生物實驗發現，TDG對于含有不同修飾胞嘧啶的DNA結合能力有顯著不同。其與含有5caC和5fC的DNA結合能力最強，而與含5hmC，5mC及正常胞嘧啶的DNA幾乎不結合。蔣華良課題組成員從計算生物學的角度出發，根據何川課題組解析得到的TDG與5caC的復合物晶體結構，開展了分子動力學模擬與結合自由能計算研究。通過計算發現，TDG活性口袋的Ile139可以和5caC形成較強的氫鍵相互作用，而同5mC和正常胞嘧啶不存在此相互作用。另外，TDG活性口袋中的His151、Tyr152同5caC的5位羧基存在很強的極性相互作用，而與其它修飾的胞嘧啶如5mC和5hmC相互作用較弱。因此可以認為，TDG的活性口袋能選擇性地結合5位具有負電性取代基的底物，如5caC或5fC。研究結果為進一步闡明TDG在表觀遺傳調控中扮演的作用提供了重要線索。

　　在轉錄因子AgrA調控機制的研究中，兩個課題組進一步合作，闡明了細菌轉錄因子AgrA的DNA結合域中分子內二硫鍵的開關在群體感應agr信號系統中發揮的重要功能。何川課題組前期研究發現，在氧化信號刺激下，AgrA結構中C199和C228會形成分子內二硫鍵，導致AgrA與DNA的解離。蔣華良課題組成員從計算生物學角度出發，運用分子動力學模擬等手段，從分子水平揭示了二硫鍵形成引起的空間位阻效應是破壞AgrA與DNA的結合的重要原因。同時，C199S的突變不會影響蛋白結構的穩定性，而C228S的突變破壞了DNA結合域的三維結構，暗示C199主要負責氧化感應，而C228對于維持蛋白結構的穩定性至關重要。模擬結果與相關突變實驗結果相吻合，證實了氧化感應是agr群體感應信號系統中的一個重要組分，細菌通過這種功能調節，可以有效緩解由其自身代謝或宿主免疫造成的氧化壓力。研究結果為深入理解細菌轉錄調控機制及新型抗菌藥物的開發提供重要依據。

　　該合作團隊有機結合生物實驗與計算模擬，積極探索表觀遺傳與轉錄調控的相互聯系，以及它們在胚胎發育與疾病產生中扮演的作用。這為進一步靶向新的表觀遺傳與轉錄調控靶標，開發高效特異的小分子活性候選化合物提供了理論基礎。

　　上述合作研究得到了美國國立衛生研究院（NIH）、中科院“干細胞與再生醫學”戰略先導專項、973、863以及上海市科委“非政府間國際合作”項目的資助。

　　三年來，兩個課題組通力合作，在表觀遺傳分子機制和相關藥物發現研究中取得一系列進展。除上述兩項合作外，其他合作正在進行中。

　　論文鏈接1

　　論文鏈接2

TDG與底物5caC結合模式圖

AgrA分子內二硫鍵的開關對其群體感應功能的調節