孕婦血漿內的高效價IgG抗體可通過胎盤屏障進入胎兒體內，與胎兒紅細胞上對應的血型抗原結合，抗原抗體反應導致胎兒紅細胞溶血，出生后臨床表現為新生兒病理性黃疸。現在證明母體高效價IgG抗體是新生兒溶血病的主要病因，孕婦不完全抗體效價檢測已成為圍產檢查的常規項目。傳統的抗人球法時間長，步驟繁瑣，不少實驗室開展有困難，有報道凝聚胺試劑盒可用于效價測定 ［1］ ，我們對這兩種方法進行了比較。
1 材料
1.1 凝聚胺（polybrene）試劑盒 臺灣BASO公司產品，包括低離子介質，凝聚胺，重懸液。
1.2 抗人球蛋白血清 上海血液中心血型參比實驗室提供。
1.3 0.1%2-巰基乙醇（2-Me） 自配。
1.4 3%標準A、B型紅細胞自配。
1.5 質控抗D血清 美國Biotest公司產品。
1.6 檢測對象 50例醫院送檢的O型孕婦血清標本。
2 方法
2.1 IgG抗體的制備 標本血清和2-Me按1:2加入玻璃試管中，封口置37℃水浴10min。另外標記四排試管，分別 檢測IgG抗A、IgG抗B抗體，每管加入生理鹽水2滴，采用倍比稀釋法將水浴后已破壞IgM抗體的待檢血清分別加入兩排試管中，此時稀釋度分別是1:4，1:8，余此類推。
2.2 抗人球法 兩排試管中分別加入標準A、B細胞各1滴，37℃水浴1小時，生理鹽水洗滌3次，加入2滴抗人球試劑，離心看結果。
2.3 凝聚胺法 兩排試管中分別加入標準A、B細胞各1滴，加入0.6ml低離子介質，2滴聚凝胺，37℃混合均勻1min，離心15s，倒去上清，加入2滴重懸液，觀察結果。
2.4 結果判斷 以產生1+反應的血清最高稀釋度來確立效價，凝聚胺法減去前兩支管4+凝集的評分（2×12分）進行修正，通過凝集強度評分標準對試驗結果進行統計學分析，評價兩種方法的差異 ［2］。
2.5 質控 兩種方法需同時做質控，陽性對照管加入2滴IgG抗D血清，陰性對照管加入2滴AB型血清或生理鹽水，陰、陽性管各加入1滴3%O型Rh（D）陽性細胞，兩種反應介質的加入同2.2、2.3。
3 結果
3.1 IgG抗A抗體效價測定 見表1。
表1 50例“O”型孕婦IgG抗A抗體效價測定 略
根據表1結果進行配對資料的t檢驗，以積分值為比較數據，t=1.32，P>0.10，修正后兩組積分值差異無顯著 性。
3.2 IgG抗B抗體效價測定 見表2。
表2 50例“O”型孕婦IgG抗B抗體效價測定 略
根據表2結果進行配對資料的t檢驗，t=1.47，0.20>P>0.10，修正后兩組積分值差異無顯著性。
4 討論
抗人球蛋白試驗是檢測血清中不完全血型抗體的經典方法，用已知抗原紅細胞測定受檢血清中相應的不完全抗體，或用已知抗體的抗血清測定受檢紅細胞上相應抗原。廣泛應用于血型鑒定，抗體的檢出和鑒定，交叉配血試驗以及孕婦IgG抗體效價測定。抗人球法干擾少，結果準確，但因為反應需水浴1h，比較費時，因此尋找抗人球法的替代實驗一直在研究中。抗入球法的關鍵是洗滌步驟，紅細胞必須被生理鹽水全程足量充分洗滌，鹽水要用力沖入管底，使積壓于管底的紅細胞松離。切勿用手指堵住管口，顛倒混勻，以防來自皮膚的蛋白污染。
國內外加速不完全抗體反應的方法研究已有較長時間，其中由美國學者Lalerazi首先提出的Polybrene法可在3min內完成實驗。該方法分致敏、促凝和再中和三步進行，BASO公司的Polybrene法操作與它極其類似。Polybrene法的實驗原理是:凝聚胺（Polybrene）是帶有正電荷的大分子物質，能夠中和紅細胞膜唾液酸組成的負電荷，減少細胞間靜電斥力，使細胞間距縮短，而又不致引起紅細胞間的非特異凝集。在生理鹽水介質中長度較短的IgG抗體不能造成抗原抗體的凝集反應，但在Polybrene與低離子介質共同作用下細胞距離被縮短，IgG抗體可在細胞間搭成復橋，離心后可見凝集反應，非特異性的凝集可被帶負電荷的重懸液（枸櫞酸鈉）消除，對IgM抗體的作用則是增強凝集反應強度 ［3］ 。其他的還有LIM（低離子強度）法，PEG（聚乙二醇）法和IRAT法等，但研究均停留在凝集反應的定性實驗，缺少對抗體效價測定研究的半定量實驗的資料。本實驗50例孕婦血清不完全抗體效價半定量檢測結果可見，凝聚胺法相對抗人球法敏感，平均高出2個滴度。通過減少凝聚胺法前兩管凝集評分（2×12分），修正后凝聚胺法與抗人球法的效價積分值統計顯示P>0.10或0.05，說明兩種方法測定抗體效價結果差異無顯著性，建議報告IgG抗A或 抗B抗體效價結果時，凝聚胺法降低2個滴度就是經典抗人球法的結果。凝聚胺試劑對冷抗體敏感，實驗需在37℃水浴1min，強冷自身凝集素干擾時可置56℃水浴1min下松動細胞扣。室溫低時若持續出現高滴度效價結果時應考慮這方面原因。纖維蛋白原會在凝聚胺試劑中凝集成纖維蛋白原塊，干擾結果，建議用血清標本 ［4］ 。另外，鑒于凝聚胺中和紅細胞表面負電荷是量的反應，正電荷與負電荷的相對量將影響實驗結果，因此每批試劑要作質控，排除假陰性、假陽性結果。凝聚胺方法操作簡便，無需1h水浴，準確性和穩定性達到實驗要求，所以在IgG抗體效價測定實驗中凝聚胺法可替代抗人球法。
參考文獻
1 Braga GW，Bordin JO，Moreira Junior G，et al.Laboratory diagnosis of auto-immune hemolytic anemia:characteristics of the manual direct test of Polybrene.Rev Assoc Med Bras，1998Jan-Mar，44（1）:16-20.
2 呂鵬.最新輸血技術學，北京:人民衛生出版社，1994，413-416.
3 Lalerazi P.The manual hexadimethrine bromide（polybrene）test:effects of serum proteins and practical applications.Transfusion1987，27（4）:295.
4 趙進生，曠婕萍.不完全抗體快速促凝劑的研制和初步應用報告.中國輸血雜志，1992，（1）:
作者單位: 510095 廣東省廣州市血液中心