試劑
1、30%丙烯酰胺貯存液：29g丙烯酰胺和1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于100ml熱水中，驗證其pH值不大于7.0。置棕色瓶中，4℃保存。
2、1.5mol/L Tris（pH8.8）溶液
3、10% SDS溶液
4、10%過硫酸銨：新鮮配制
5、 TEMED溶液：4℃保存
6、1.0 mol/L Tris（pH6.8）溶液
7、2×樣品溶解液：2%SDS，5%巰基乙醇，10%甘油，0.02%溴酚藍，0.01mol/L Tris-HCl（pH8.0）緩沖液。
8、5×Tris-甘氨酸電極緩沖液：每 1000ml該溶液中，含15.1g Tris，94g甘氨酸和50ml 10%（W/V）SDS貯存液。
9、固定液：冰乙酸:甲醇: 水=1:2:7
10、考馬斯亮藍R染色液：每100ml甲醇、水、冰乙酸混合物（9:9:2）中，溶解0.25g考馬斯亮藍R，過濾除去未溶物。
11、脫色液：甲醇:水:冰乙酸=9:9:2
注：1、2、5、6、7由教師提供，其余由學生自己配制，其中8可在凝膠凝固的過程中配制，9、10、11在電泳時配制。
操作步驟：
1、準備步驟
1）將凝膠板依次用水、SDS、水、無水乙醇、水洗滌干凈，然后使其自然風干或烘干。
2）試樣格（梳子）臨用前用無水乙醇擦拭，讓其揮發至干。
3）滅菌槍頭、eppendorf管。
2、制備凝膠
1）安裝玻璃板、板條，并將玻璃板固定在電泳槽中，以5%瓊脂封底。
2）配制10%的分離膠（20ml）：依次將8ml蒸餾水，6.7ml 30%丙烯酰胺貯存液，5ml 1.5mol/L Tris（pH8.8）溶液，0.2ml 10% SDS溶液，0.2ml 10%過硫酸銨，0.008mlTEMED混合，立即灌膠。
3）迅速在兩玻璃板間隙中灌注分離膠，直至剩余的板寬比梳子長度多1cm。小心在膠上覆蓋一薄層正丁醇。
4）在分離膠聚合的過程（約40分鐘）中，配制5%的積層膠（8ml）：依次混合5.5ml蒸餾水，1.3ml 30%丙烯酰胺貯存液，1.0ml
1.0 mol/L Tris（pH6.8）溶液，0.08ml 10% SDS溶液，0.08ml
10%過硫酸銨，0.008TEMED。TEMED應在灌膠前才加入。
5）分離膠聚合完全后，倒去正丁醇，用蒸餾水沖洗膠面數次，用濾紙吸干膠面上的殘余水。
6）灌注積層膠，立即插入干凈的梳子，避免產生氣泡。
7）積層膠聚合完全后，小心拔出梳子，用移液器吸取電極緩沖液清洗加樣孔數次，以除去未聚合的丙烯酰胺。
8）在上下電泳槽中加入足夠的電泳緩沖液。
3、樣品的制備
在蛋白溶液中加入等體積的2×樣品溶解液，使蛋白的終濃度為3-4mg/ml，混合液在沸水浴中加熱3分鐘，冷卻后即可上樣。
4、上樣
用微量進樣器上樣，每加入一種樣品，應在下槽中洗滌加樣器數次，最后在空白加樣孔中加入等體積的SDS樣品溶解液。
5、電泳
裝好冷凝水系統，打開電源，初始電壓為 100-120V，當染料進入分離膠（這段時間約為20min）后，將電壓提高到200-220V，繼續電泳直至染料到達離凝膠底部1cm處。
6、后處理
1）固定：從電泳裝置上卸下玻璃板，用鑷子小心撬開玻璃板，除去積層膠部分，將分離膠移入固定液（固定液的量至少為膠體積的5倍）中固定，直至染料由藍綠色變為黃色。
2）染色：除去固定液，加入染色液（用量同上），室溫染色8小時或60℃染色2小時。
3）脫色：回收染色液，將凝膠浸泡于脫色液中，直至背景脫至無色，其間更換脫色液3-4次。
結果
繪制蛋白圖譜，并對其進行必要說明。
注意事項
N,N’-亞甲雙丙烯酰胺為神經毒性物質，可經皮膚直接吸收，使用時應避免其直接接觸皮膚，必要時應戴手套。但其凝固后就變成無毒物質。