【測定原理】
PK
活性測定的原理基本同PK 熒光斑點試驗,主要不同的是用紫外分光光度法定量測定結果。在10 分鐘內、波長340nm 下,測定孵育液中NADH
吸光度的變化,通過測定單位時間內NADH 減少的量來計算PK 的活性。由于PK 是一種變構酶,在低濃度磷酸烯醇丙酮酸(PEP)時,PK
可被微量的果糖‐1,6‐二磷酸刺激而增加,因此,應用低濃度果糖‐1,6‐二磷酸(FDP)觀察PK 被刺激的反應,有助于高濃度PEP
活性近于正常的PK 變異型的診斷。
【標本要求】
常見抗凝劑有肝素、EDTA(詳見葡萄糖‐6‐磷酸脫氫酶活性測定)及ACD 抗凝(0.5ml ACD 抗凝2.0ml全血)。其中ACD 抗凝效果較好,約90%紅細胞酶在此抗凝劑中置于4℃下能保持活性穩定達2 周以上。
【結果報告】
報告方式同G6PD 活性測定。
【參考范圍】
I CSH 推薦的Blume 法:正常人15.0 ±1.99I U/gHb;低PEP 濃度的正常紅細胞PK 活性:正常值的14.9%±3.71%,37℃;低PEP 濃度加FDP 刺激后正常紅細胞PK 活性:正常值的43.5%±2.46%,37℃。
【臨床意義】
PK 活性下降見于PK 缺陷癥患者。純合子PK 值在正常活性的25%以下;雜合子為正常的25%~50%。
【方法學評價】
本方法能準確地測定患者PK
活性,是一種確診試驗,在臨床上也較容易開展,所以臨床上該試驗是確診PK 缺陷癥的最主要實驗室測定手段。如果臨床高度懷疑PK 缺乏,而PK
活性測定正常時,應進行底物系統的PK 活性定量測定,以確定有無PK
活性降低。另外,處理標本時,如沒有盡量除去紅細胞以外的其他成分的話,可使結果升高,因為白細胞中的PK
活性比紅細胞中高出數倍。為了盡量排除某些因素對它的影響,最好同時作陰性對照和陽性對照。
參考文獻:
1 王霄霞 俞 康.血液系統疾病的檢驗診斷.第1版.北京.人民衛生出版社,2007年01月