絲瓜提取物對衰老小鼠學習記憶力、腦組織形態學及免疫功的影響
目的:觀察絲瓜提取物對衰老小鼠學習記憶能力、腦組織形態學及免疫功能的影響。
方法:經篩選的昆明種小鼠隨機分為對照組、衰老組、ALL瓜提取物187.5 mg/kg,375 mg/kg,750 mg/kg3個劑量組。除對照組以外，均在頸背部皮下持續注射D伴乳糖復制衰老模型，利用跳臺實驗及Morris水迷宮測試各組小鼠學習記憶能力，臟體比方法測定各組小鼠腦指數、胸腺指數和脾臟指數，ELISA法檢測各組小鼠血清中細胞因子ILK, IFN、的濃度和T淋巴細胞增殖活性，HE染色法觀察各組小鼠腦組織形態學變化。結果:衰老組在跳臺實驗的能力測試中錯誤次數增多;在水迷宮測試中逃避潛伏期延長，平臺象限游泳時間縮短，穿越平臺次數減少;腦組織細胞數量明顯減少;腦指數、胸腺指數和脾臟指數減少;IL 2,IFN、水平和T淋巴細胞增殖活性降低;與衰老組比較，絲瓜提取物(375 mg/kg,750mg/kg)可明顯拮抗上述指標變化。結論:絲瓜提取物可以改善衰老小鼠的學習記憶，同時增加機體免疫活性，達到延緩衰老進程的作用。
關鍵詞 絲瓜提取物;衰老;;D-半乳糖;學習記憶能力;形態學
衰老是分子、細胞、器官乃至整個機體功能衰退的復雜的生理、病理變化過程。學習和記憶能力減退是腦功能衰退的表現，其機理是氧自由基介導的脂質過氧化效應。絲瓜系葫蘆科植物具有豐富的營養價值。有報道絲瓜提取物有抗應激、抗病毒、促進生長及增強免疫等功能。有研究顯示絲瓜的果、葉和藤的提取物可增強正常小鼠腹腔巨噬細胞內酸性磷酸酶的活性以及巨噬細胞吞噬功能的作用。證明絲瓜提取物對正常小鼠免疫功能的影響。絲瓜中分離得到的黃酮類物質可能是其發揮體內抗氧化作用的主要物質。而絲瓜提取物對衰老模型小鼠的免疫調節作用還少見報道，實驗主要觀察絲瓜提取物對D-半乳糖致衰老小鼠行為記憶及免疫調節的影響。
材料與方法
1. 1試驗藥物 絲瓜提取物為比例提取物，由西安森冉生物有限公司提供，通過80目篩，棕黃色精細粉末，1g提取物相當于15g生藥。腦復康(毗拉西坦片)，購自上海信誼藥廠有限公司，批號:201309030
1.2動物 選取72只雄性昆明種小鼠，SPF級，體重25 -35g，許可證號:SCXK(預)2010-00020
1.3試劑 D-半乳糖(上海試劑二廠);RPMI-640培養液(上海元龍生物技術有限公司)
1.4儀器 XR-3TB小鼠跳臺分析系統(上海欣軟信息科技有限公司)，XR-XM101 Morris水迷宮(上海欣軟信息科技有限公司)，高速冷凍離心機(上海創賽科學儀器有限公司)，酶標儀(ELX一80型)，紫外可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)，C02培養箱(BPN-150CH)。
1.5方法 小鼠按體重隨機分為正常組、模型組、絲瓜提取物187.5 mg/kg,375 mg/kg,750mg/kg劑量組;除正常組外，其余各組小鼠頸背部皮下注射D伴乳糖150mg/kg，連續8周，誘導衰老模型;同時，陽性對照組小鼠灌胃給予腦復康800mg / kg、分別灌胃給予187.5 mg/kg,375 mg/kg,750mg/kg劑量的絲瓜提取物，同時正常組和模型組小鼠給予等體積的0. 9%生理鹽水灌胃。8周后，對各組小鼠的學習記憶能力進行測試。
1. 5. 1跳臺實驗 待環境適應3min后取出，箱底通以36V的交流電，其正常反應是跳到平臺上以躲避電擊，將小鼠放入絕緣平臺上，動物從跳到平臺上至第1次跳下的時間為潛伏期和5min內受電擊的次數(錯誤次數)，記錄為學習前潛伏期和錯誤次數，作為小鼠的學習成績;24h后，重復操作一次，記錄學習后潛伏期和錯誤次數，作為小鼠的記憶成績。
1.5.2Morris水迷宮定位航行實驗及空間探索實驗 水迷宮的水池分為4個象限，迷宮上方安置著連接顯示系統的攝像機，同步記錄小鼠運動軌跡。實驗過程中水池周圍的參照物保持不變。實驗分為前5天的定位航行實驗與第6d的空間探索實驗。(1)定位航行實驗:歷時5天，每天1次。分別從四個象限將小鼠頭朝池壁入水，自動攝像系統和計算機分析處理系統處理，記錄小鼠120秒內找到平臺的時間(即逃避潛伏期)。超過120秒找不到平臺，可引導其找到平臺，滯留平臺15秒，逃避潛伏期記成120秒。(2)空間搜索實驗:第6天撤去平臺，小鼠隨機在一象限而向池壁放入水中，之后入水均固定于此象限，記錄120秒內平臺所在象限的游泳時間和穿越平臺次數。
1.5.3小鼠腦、胸腺和脾臟指數測定 學習記憶實驗結束后，準確稱其體質量后脫頸椎處死小鼠，超凈工作臺中無菌取出全腦、胸腺和脾組織，用預冷的生理鹽水反復沖洗，用濾紙吸干后，用電子天平稱其重量，訓一算各臟器指數，臟器指數=臟器質量( mg)/小鼠體重(g)
1.5.4 T淋巴細胞轉化實驗 處死小鼠后，按常規無菌操作取小鼠脾臟制備成脾細胞懸液，調整細胞濃度為1 x 10} /ml。在96孔細胞培養板的每孔加脾細胞0. 2m1， ConA 15ul，其終濃度為6ug/ml，1個樣品設3個復孔，以不加ConA為對照·加蓋置入5 % C02。 37℃條件下的培養箱中培養72h。在酶標儀波長560nm處測A值，計算刺激指數(SI)=實驗孔A值/對照孔A值。