2 ）血清對照組（ 7 號管）
取 2 只 Hela 細胞培養管，棄去培養液，每支試管中加 1:20 稀釋的待檢血清 0.1ml ，然后送 37 ℃水浴保溫 1 小時取出，于每支培養管中加入 0.9mlEagle 維持液，送 37 ℃ 5%CO 2 培養箱培養。
3 ）細胞對照管（ 8 號管）
取 2 只 Hela 細胞培養管，棄去培養液，送 37 ℃ 5%CO 2 培養箱培養。
3 結果
在培養第 3 ， 5 ， 7 天各觀察一次，觀察時將細胞培養管從溫箱取出，顯微鏡低倍視野下觀察有無 CPE
（細胞病變效應），并按表記錄。當細胞出現 CPE 時，可見磁暴生長減緩或停止生長，細胞變大，腫脹，甚至死亡，脫落。觀察后，出現 CPE
的培養管可棄去，未出現 CPE 的培養管繼續送 37 ℃ 5%CO 2 培養箱培養至第 7 天。
中和實驗 CPE 結果記錄:
結果判定
1 病毒對照組均應出現 CPE 為“＋”
2 血清對照組和細胞對照組不應出現 CPE ，為“－”。
二） 中和方法實驗二——用已知免疫血清鑒定病毒型別
1 材料
1 ） 病毒懸液：選用未知型別的脊髓灰質炎病毒 1 ： 10 稀釋液 1ml 。
2 ）免疫血清：選用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰質炎病毒免疫血清（ 1 ： 5 稀釋）各 0.35ml 。
3 ）敏感細胞：選用 Hela 細胞培養管 15 支。
4 ）其余材料同方法一。
2 方法
a 實驗組實驗方法
1 ） 取待鑒定病毒稀釋液 0.75ml 分別與三型特異性免疫血清（各 0.25ml ）等量混合，在 37 ℃ 水浴 1 小時取出。
2 ）取 6 支 Hela 細胞培養管，棄去培養液，每支培養管中加入混合液 0.2ml ，每份混合液接種 2 支細胞培養管。接種后，培養管置
37 ℃水浴箱中水浴 1 小時取出，于每支培養管內加入 Eagle 維持液 0.8ml ，送 37 ℃ 5%CO 2 培養箱培養。
b 實驗對照組實驗方法
1 ）病毒對照組
取 2 只 Hela 細胞培養管，棄去培養液，每支試管中待檢病毒懸液 0.1ml ，送 37 ℃水浴保溫 1 小時取出，于每支培養管中加入 0.9mlEagle 維持液，送 37 ℃ 5%CO 2 培養箱培養。
2 ）血清對照組
取 6 只 Hela 細胞培養管，棄去培養液，每支試管中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型免疫血清各 0.1ml ，然后送 37 ℃水浴保溫 1 小時取出，于每支培養管中加入 0.9mlEagle 維持液，送 37 ℃ 5%CO 2 培養箱 培養。
3 結果 :
4 結果判定
1 ）方法同方法一
2 ）鑒定病毒。待鑒定的病毒與哪一型免疫血清的中和試驗結果為陽性，即為該型病毒。
注意事項
1 必須選用對細胞有較穩定致病力的病毒。
2 滅活的血清必冷卻后應用。
3 本試驗必須要有陽性對照，陰性對照和細胞對照