| 實驗步驟 |
一、材料
1. 緩沖液和溶液
丙烯酰胺：亞甲雙丙烯酰胺（29:1) (%, m/V)
過硫酸銨（10%，m/V）
乙醇
6X 凝膠載樣緩沖液
KOH/甲醇
硅化液（如 Sigmacote 或 Acrylease)(可選或不選）
5X TBE 電泳緩沖液
TEMED
2. 核酸和寡核苷酸
DNA 樣品
3. 專用設備
夾子或鐵皮制紙夾（6~8 個，2 inch/5 cm 寬）
電泳裝置，玻璃板，梳子和間隔片
凝膠密封帶
凝膠測溫條（可選或不選）
微量移液器及拉長的塑料洗頭
凡士林
注射器（50 ml)
二、方法
安裝電泳裝置和配制凝膠溶液
1. 必要時可用 KOH/甲醇清洗玻璃板和間隔片。
2. 用溫熱的去污劑溶液洗滌玻璃板和間隔片，再充分漂洗，先用自來水，再用去離子水。應拿取玻璃板的邊緣部分或戴手套操作，以免手上的油脂殘留在玻璃板的工作面上。用乙醇沖洗玻璃板，并將其置于一邊晾干。
3. (可做可不做）其中一塊玻璃板的一面用硅化液處理（如 Sigmacote 或 Acrylease): 在化學通風櫥內，將玻璃板放于一疊紙巾上，倒少量硅化液于其表面上，用 Kimwipes 紙巾涂抹均勻，然后用去離子水沖洗、紙巾擦干。
4. 安裝玻璃與間隔片：
(1) 將較大的（不帶凹口）玻璃板平放在實驗臺上，在玻璃板的兩側將間隔片平行置于其邊緣放妥。
(2) 用凡士林輕涂以助于間隔片在后面的操作中保持原位。
(3) 將內板（帶凹口的玻璃板）在間隔片上放妥。
(4) 用夾子或鐵皮制紙夾將玻璃板夾在一起，將整塊玻璃板的兩邊及底部用凝膠密封帶封緊，形成不透水密封。
5. 根據玻璃板的大小和間隔片的厚度計算所需凝膠的體積。制備適宜濃度的凝膠溶液。
6. (可做可不做）將所需用量的聚丙烯酰胺：亞甲雙丙烯酰溶液放于一干凈的帶側臂的燒瓶中，加入磁力攪拌子，抽真空脫氣。開始脫氣應溫和一些，并邊脫氣邊旋轉燒瓶直至不再有氣泡溢出為止。
灌制凝膠
7. 下面的操作需要戴手套，在托盤上進行，以免濺出的丙烯酰胺：亞甲雙丙烯酰胺溶液灑在實驗臺上。動作應迅速，于丙烯酰胺聚合前完成。
(1) 每 100 ml 丙烯酰胺：亞甲雙丙烯酰胺溶液中加入 35 μl TEMED, 輕輕旋轉混勻溶液。
(2) 用 50 ml 注射器吸取凝膠溶液，調轉注射器，排凈進入針管的空氣。將注射器的針頭插入兩塊玻璃板之間的空隙，注入丙烯酰胺溶液，幾乎注滿該空隙。
(3) 將玻璃板斜靠在試管架上，與實驗臺面成約 10° 角。
8. 立即將合適的梳子插入到凝膠中，小心勿使梳齒下留有氣泡。梳子的頂端應略高于玻璃板的上沿。用鐵皮制紙夾將梳子夾緊，使其就位。必要時，用剩余的丙烯酰胺溶液完全充滿模具。確認無丙烯酰胺溶液從模具里漏出。
9. 丙烯酰胺于室溫聚合 30~60 min。若凝膠回縮明顯，應補加丙烯酰胺：亞甲雙丙烯酰胺溶液。
10. 聚合完全后，用 1X TBE 浸潤的紙巾包繞梳子和凝膠的頂部。然后用 Saran Wrap 膜密封整塊凝膠，4℃ 保存，直至使用。
11. 當準備好進行電泳時，在梳子的周圍及其頂部噴些 1X TBE 緩沖液，從聚合的凝膠中小心取出梳子。用注射器吸取 1X TBE 沖洗加樣孔。用剃須刀或解剖刀除去凝膠底部的密封膠帶。
上樣與電泳
12. 將凝膠放入電泳槽中，用大號鐵皮制夾子夾住其進緣或用裝置本身的夾子固定。帶凹口的玻璃板應面對緩沖液槽向里放置。
13. 用配制凝膠溶液同一批次的 5X TBE 配制電泳緩沖液灌滿緩沖液槽。用一根彎頭巴斯德吸管或注射器針頭排除藏匿于凝膠底部的氣泡。
14. 用巴斯德吸管或注射器再次吸取 1X TBE 沖洗加樣孔。將 DNA 樣品與適量 6X 凝膠載樣緩沖液混合，用 Hamilton 注射器或帶有拉長的塑料吸頭的微量移液管加入加樣孔。
15. 將電極與電源相連（正極接下槽)，打開電源，進行電泳。
16. 電泳至標準參照染料遷移至所需位置。關閉電源，拔掉插頭，棄去電泳槽中的電泳緩沖液。
17. 卸下玻璃板，用解剖刀或剃須刀片除去凝膠密封膠帶。將玻璃板放在實驗臺上 （硅化的玻璃板在上面)。用間隔片或塑料楔將上面的玻璃板的一角撬起。檢査一下凝膠仍應附著在下面的玻璃板上。將上面的玻璃板平穩的移開，去掉間隔片。
18. 檢測聚丙烯酰胺凝膠中 DNA 條帶的位置。
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