3.2.2 實驗結果
我們分別使用中空纖維 750k和500k超濾柱(GE)、300k和500k超濾膜包(分別來自于兩家進口品牌) 進行流感病毒尿囊液的濃縮洗濾,考察處理速度、病毒 HA收率、總蛋白和濃縮液澄清度等指標。

使用中空纖維和膜包進行濃縮,均采用先濃縮后洗濾的策略,先濃縮20倍即開始濾洗5倍,然后繼續濃縮至50x左右。這樣可以避免高濃度卵清蛋白聚集,提高卵清蛋白的透過去除效率,提高產品質量。
3.2.3 分析討論
我們比較了上述不同孔徑的中空纖維膜和超濾膜包對流感病毒尿囊液的濃縮性能:

使用中空纖維膜和超濾膜包進行流感病毒尿囊液濃縮,除 500k膜包在透過端有HA血凝滴度檢出外,其余三種膜均無漏過,HA收率令人滿意。中空纖維750k 濾膜平均處理速度為 35LMH,比 300k膜包快60%以上。
中空纖維 750k和中空纖維 500k相比,750k 濾膜使用切向流速相對較低,可以在保證病毒穩定性的基礎上,適當提高切向流速,進一步提高處理速度。
所得尿囊濃縮液中,單位血凝價的總蛋白(TP/HA)可以用于快速直觀的表征濃縮液中的雜蛋白殘留量。單位血凝價的總蛋白含量越低,說明濃縮過程的雜蛋白透過去除更徹底,所得濃縮液病毒相對純度越高。由上表的數據可見,500k和 750k中空纖維進行濃縮,雜蛋白的含量均低于 300k 膜包,其中 500k中空纖維膜單位血凝價的總蛋白比 300k膜包低7%,750k中空纖維單位血凝價的總蛋白比 300k膜包低 1倍以上,中間產物質量顯著得到改善。

將不同孔徑中空纖維濾膜所得尿囊濃縮液外觀進行比較 (如圖6):中空纖維750k顏色淺白,黏度低,卵清蛋白去除較為徹底;而500k中空纖維膜仍為淺黃色,去除效果稍差。相比傳統 300k膜包而言,中空纖維顯著改進了濃縮液中間產物質量,有利于減輕后期4FF層析純化的負荷,保證整體工藝的可靠性。
在此基礎上,我們下一步將使用中空纖維750k濾膜對不同型流感尿囊液的濾洗時機、濾洗緩沖液組成、切向流速和壓力等參數進行深入優化,避免卵清蛋白聚集,進一步提高卵白去除效率。