乙型肝炎表面抗原定性檢測（HBsAg）操作規程

1.檢驗目的

    檢測HBsAg主要是用于乙型肝炎的的診斷、招工體檢、征兵體檢、幼兒入學、獻血員篩選、血液制品的復檢、了解乙肝病毒感染者的感染狀況、療效觀察及預后評估，另外還用于乙型肝炎的流行病學調查。

    2.方法原理

    采用ELISA雙抗體夾心法，即酶聯免疫吸附法，包被HBsAb于瓊脂微孔與標本中的HBsAg形成Ab-Ag復合物，再于酶標HBs抗體結合，加入TMB底物產生顯色反應。

    3.性能指標

    此方法快速簡便、特異性強、檢測靈敏度度0.5ng/ml.

    4.標本收集

    4.1標本類型：靜脈血或動脈血的血清或血漿標本均可作為檢測標本（抗凝劑可用肝素鈉、枸櫞酸鈉、ACD、CPDA-1或EDTA,抗凝劑的質量應符合化試藥品要求--化學純或分析純，使用的比例以廠家推薦為準）;其他體液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等體液可以作為檢測標本，但加熱滅活的血清和血庫的庫存血則不宜作為檢測標本。

    4.2標本留取：以空腹為宜，收到標本后最好立即離心留取血清或血漿（凝固血應待其充分凝固后收集血清）,不能有殘留的紅細胞、纖維蛋白絲，使用肝素治療的病人宜在肝素治療前抽血。

    4.3標本保存：留取的標本最好在3小時內檢測，不能立即檢測的應放置于2-8℃最長達14天（可以含有凝塊但要密閉以防蒸發）,或者-10℃最長達14天（不能反復凍融也不能含有凝塊和紅細胞）.

    4.4標本容器：盛放標本的容器必須為潔凈的一次性真空采血管、玻璃試管、一次性的不同規格的塑料離心管

    4.5標本外送：如涉及到需要外送的標本，必須以規定的容器（0.5ml塑料離心管）存放并密封，并根據郵寄規則和要求進行包裝，運送時還要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由專人運送至指定地點指定接收人。

    4.6拒收標本：凡與4.1-4.5所述內容不符的標本，檢驗人員應向臨床或就診者說明拒收標本的原因，并提出解決的方案或建議。

    5.分析系統

    5.1分析儀器：為美國BIO-RAD公司提供的MODEL550型酶標儀，儀器校準請參見儀器操作規程。

    5.2分析試劑：為上海科華公司提供的配套的HBsAg試劑盒，規格為96test/盒，2-8℃貯存，有效期12個月；在效期內使用試劑。

    5.3質控試劑：為上海公司提供的配套的HBsAg試劑盒中所附帶的陰、陽性對照，2-8℃貯存，有效期12個月每月一次質控小結，失控要有記錄及糾正的結果。

    6.操作方法

    6.1每孔加入待測標本50微升。

    6.2每孔加入酶結合物1滴，充分混勻，封板，置37℃孵育30分鐘。

    6.3手工洗板：棄去孔內液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復5次后拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。

    6.4每孔加顯色劑A液、B液各1滴，充分混勻，封板，置37℃ 孵育才15分鐘。

    6.5每孔加入終止液1滴，混勻。

    6.6用酶標儀讀數，數值取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）,先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。