原理
乙醇酸氧化酶在光呼吸作用中起重要的作用，在它的作用下將乙醇酸氧化生成乙醛酸和過氧化氫，反應如下：
如果我們以二氯靛酚作為氫受體，接受乙醇酸氧化時脫下的H ，使二氯靛酚還原，此時原來為藍色的染料則褪至無色，其反應如下：
利用染料顏色的變化，即可對酶的活性進行比色測定。由于在酶的粗制品中還含有靛酚氧化酶，它能使二氯靛酚氧化，影響比色測定。KCN能抑制靛酚氧化酶，而對乙醇酸氧化酶沒有作用，KCN用量需預先試驗確定之。
儀器藥品
721型分光光度計 離心機
研缽 試管架
移液管 漏斗
燒杯 試管
紗布 10%醋酸
硫酸銨 0.1% 2，6— 二氯靛酚
0.1mol/L磷酸鉀緩沖液，pH8.0（見附表2）
0.02mol/L磷酸鉀緩沖液，pH8.0：先配0.02mol/L K2HPO4，然后用0.02mol/L KH2PO4調至pH8.0。
0.04mol/L乙醇酸鉀：稱取304mg乙醇酸用氫氧化鉀中和，最后用蒸餾水定容至100ml。
0.01mol/L KCN：稱取65mg KCN溶于100ml 0.01mol/L NH4OH中（注意：KCN有劇毒！）。
操作步驟
1．酶粗制品的制備
新鮮菠菜葉或煙草葉，自來水洗凈，用吸水紙吸干，稱取30g，加30─60ml蒸餾水，在0─5℃下研磨，經4層紗布過濾，濾液用1000r/min離心15分鐘，棄去沉淀。然后用10%醋酸調節pH至5.4，用3500─4000r/min離心15分鐘，除去蛋白質沉淀。于上清液中加硫酸銨，使達到20%飽和度（見附表8），在磁力攪拌器上邊加邊不停地攪動30分鐘，離心除去沉淀，于上清液中再加入硫酸銨，使達到30%飽和度，離心20分鐘，沉淀即為酶的粗制品。用少量0.02mol/L磷酸鉀緩沖液（pH8.0）溶解，使其體積為開始時提取液體積的1/10，保存于冰箱中，待測。
2．酶活性測定
取一試管加入0.6─0.8ml 0.01mol/L KCN、0.5ml 0.04mol/L乙醇酸鉀、0.5ml稀釋5─10倍的酶液，加0.1mol/L磷酸鉀緩沖液使體積達3.7ml，最后加入0.3ml二氯靛酚染料，使其總體積為4ml，迅速混勻倒入光徑為1cm的比色杯中，于620nm讀取吸光度。另取比色杯不加染料以緩沖液代之，作為空白調零用。
加入染料1分鐘后開始讀數，每隔30秒鐘讀數一次，大約在3—4分鐘內吸光度A620成直線下降。
3．計算
以每分鐘使A620下降0.01所需的酶量定為1酶活性單位，也可以用每分鐘使A620下降0.01所需的材料鮮重表示酶的活性。此方法可以分析酶活力為1—15單位。