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  • 發布時間:2020-08-11 09:09 原文鏈接: 亞硫酸氫鹽修飾后測序法檢測甲基化

    實驗材料 DNA
    試劑、試劑盒 NaOH苯二酚(氫醌)亞硫酸氫鈉石蠟油
    儀器、耗材 離心管恒溫水浴鍋鋁箔紙
    實驗步驟 
    1.將約2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀釋至50ul;
     
    2.加5.5ul新鮮配制的3M NaOH;
     
    3. 42℃水浴30min;
     
    水浴期間配制:
     
    4.10mM對苯二酚(氫醌),加30ul至上述水浴后混合液中;(溶液變成淡黃色)
     
    5. 3.6M亞硫酸氫鈉(Sigma,S9000),配制方法:1.88g亞硫酸氫鈉使用DDW稀釋,并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0,最終體積為5ml。這么大濃度的亞硫酸氫鈉很難溶,但加入NaOH后會慢慢溶解,需要有耐心。PH一定要準確為5.0。加520ul至上述水浴后溶液中。
     
    6.EP管外裹以鋁箔紙,避光,輕柔顛倒混勻溶液。
     
    7.加200 ul 石蠟油,防止水分蒸發,限制氧化。
     
    8.50℃避光水浴16h。

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