一、 操作技術錯誤（最常見）
二、紅細胞標本問題
未加入抗體或血清
實驗溫度（37℃凝集會下降）
未識別溶血
血清與紅細胞比例不當
離心速度、時間不夠
使用失效或錯誤試劑
實驗結果記錄、解釋錯誤
離心速度過大、時間過長
使用了受到細菌污染的試劑
試驗器皿不干凈
實驗結果記錄、解釋錯誤
患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的紅細胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受O型紅細胞
某些ABO基因變異的個體或ABO亞型紅細胞，一些白血病或其他惡性疾病患者的紅細胞ABO抗原太弱，應用抗－A、抗－B試劑未能出現預期的凝集反應
紅細胞獲得性或遺傳性的異常，如獲得性B抗原紅細胞或Tn/T多凝集紅細胞，人血清抗－A、抗－B試劑可能與這些異常的紅細胞反應
使用未洗滌的紅細胞標本，其表面黏附的血漿或血清中含針對抗－A、抗－B試劑中染色劑或其他成分的抗體，出現假陽性反應
患者血清中高活性、高濃度冷自身抗體嚴重致敏（包被）自身紅細胞，以至自發地發生凝集，而不是抗體試劑的特異性免疫反應所致
紅細胞表面包被IgG類抗體
三、血清標本的問題
小的纖維蛋白凝集的紅細胞凝塊被誤認為是血液凝集，如使用血漿標本或未完全去除纖維蛋白的血清標本時。
免疫抑制疾病患者血清中ABO抗體減少或消失。老年人ABO抗體減弱
4-6月齡內嬰兒血清中ABO抗體陰性或很弱，一般只測正定
血清中不正常濃度和比例的蛋白質成分或高分子蛋白增多可引起非特異凝集，如緡錢狀紅細胞的非特異凝集。
血清中含抗－A、抗－B以外的其他紅細胞抗體，如抗－M、抗－I等。
患者接受了ABO血型不同的骨髓移植
患者血清中含有針對紅細胞保護劑的抗體
大量C 1分子由于異常高效價的補體結合抗體抗－A、抗－B作用，結合到紅細胞膜上，遮蔽了A、B抗原位點，不發生凝集
四、分析和處理
1.重新采集標本，以避免采集、標記、污染等錯誤
2.查詢患者既往病史、輸血史、用藥史、骨髓移植史
3.徹底洗滌標本或試劑紅細胞
4.應用抗－AB、抗－A1、或抗－H檢測紅細胞
5.分析抗篩結果，確定結果是否受同種異型或自身冷抗體干擾
6.室溫孵育30min后，離心觀察結果，以檢測弱的抗原抗體反應
7. 做自身紅細胞做對照，以確定自身抗體的干擾
意外的血清學反應所致的ABO正反定不符
抗體太弱或消失
非正常高濃度的抗－A、抗－B可引起前帶現象
A2、A2B或其他ABO亞型人血清中可能有抗－A1
患者血漿蛋白濃度過高或靜脈輸用了大量大分子藥物等原因，可發生類似凝集現象，如緡錢狀凝集
冷自身抗體，如抗－I、抗－IH、抗－IA等
自身免疫性溫型抗體
同種抗體/意外抗體
五、ABO正反定不符及其處理
1.抗體太弱或消失
如新生兒、老年人、免疫抑制患者，應注意患者的年齡和診斷
2.非正常高濃度的抗－A、抗－B可引起前帶現象，導致假陰性,將血清稀釋或用EDTA（2.5％）處理可消除
3.A2、A2B或其他ABO亞型人血清中可能有抗－A1, 抗－A1只凝集A1型紅細胞而不凝集A2、O型紅細胞
4.患者血漿蛋白濃度過高或靜脈輸用了大量大分子藥物等原因，可發生類似凝集現象，如緡錢狀凝集
將血清用生理鹽水稀釋3倍或用鹽水替換技術可消除
5.冷自身抗體，如抗－I、抗－IH、抗－IA等(自凝)
a.所有試劑及細胞37℃孵育，37℃下判讀結果
b.將冷自身抗體吸收
c.將血清用0.01mol/L DTT處理和再定型
6.自身免疫性溫型抗體
自身免疫性溶血性貧血病人血清中可有溫型自身抗體，37℃反應比室溫強
血清能凝集自身和其他各型紅細胞，若紅細胞上吸附自這種自身抗體，在自身或他人血清中均可出現凝集，正定被誤認為AB型，反定被誤認為O型。
用遞增溫度（22℃，37℃，45℃）洗滌紅細胞后再做血型鑒定
7.同種抗體/意外抗體
室溫下抗-P、抗-M、抗E等，可能出現意外反應，干擾ABO血型鑒定
抗體特異性抗體鑒定，選擇抗原陰性的紅細胞做反定
六、應用舉例
多發性骨髓瘤致ABO血型鑒定困難1例
多發性骨髓瘤（MM）：
一種惡性漿細胞疾病，大量分泌異常的單克隆免疫球蛋白(M 蛋白) ,影響紅細胞表面負電荷狀態,血清蛋白濃度和比例異常,A/G比例失調,紅細胞呈緡錢狀非特異性聚集,給血型鑒定帶來一定的困難。
血型血清學檢查
正定： A型，RhD（＋）
反定： O型
直抗：（－）
抗篩：（＋）
處理
1.吸收試驗
6次洗滌后的患者壓積紅細胞加等量的抗－A、抗－B血清（1:128）4℃ 1h，離心，取上清，測吸收液的抗－A、抗－B效價
抗－A降低明顯，抗－B 1：128
2.放散試驗
吸收后的患者RBC用NS洗滌6次＋等量的NS，56℃ 10～15min，放散液與5％標準 A、B RBC反應，Ac:++ Bc: -
吸收放散試驗證明：患者RBC上有A抗原，無B抗原,為A型
3.將患者血清用O型標準RBC吸收
等份血清＋等份O細胞振蕩室溫 15～30min，離心，取上清，轉移到另一等份O細胞中，吸收后的血清與標準A、B紅細胞反應，Ac: - Bc:++
說明患者血清中有抗-B，無抗-A
患者血型最終確定為A型 RhD（＋），輸注2U 經過篩選的A型懸浮RBC后，未見任何不良反應。