配基要結合到載體上,首先要活化載體上的功能基團,再將配基連接到活化基團上。此偶聯反應必須在溫和條件下進行,不致使配基和載體遭到破壞;且偶聯后要反復洗滌載體,以除去殘存的未偶聯的配基,還要測定偶聯的配基的量。
最常用的載體是瓊脂糖4B(Sepharose4B)。把瓊脂糖與溴化氰在pH值為11條件下進行處理,能使瓊脂糖活化。此時,溴化氰與瓊脂糖的羥基反應生成氨基甲酸酯基團。若有鄰位羥基存在,則形成亞氨碳酸基團。經取代后的載體最后用有機合成法和配基結合,這種配基必須含有一種適合反應的基團,通常是氨基或羥基。