分離方法說明：
取新鮮抗凝血1ml，與生理鹽水1:1 混勻后，小心加于2ml細胞分離液之液面上；以400g（約1500轉/分，半徑15cm水平轉子）離心20分鐘，此時離心管中由上至下細胞分四層。第一層：為血漿層。第二層：為環狀乳白色淋巴細胞層。第三層：為透明分離液層。第四層：為紅細胞層。收集第二層細胞放入含生理鹽水4-5ml的試管中，充分混勻后，以400g（約1500轉/分）離心20分鐘。沉淀經2次洗滌后即得所需淋巴細胞。
注： 提取率約為80%。
注意事項：
A．本分離液要求血液為新鮮抗凝血，避免冷凍和冷藏；在收集血液和分離過程中，應注意無菌操作，避免微生物污染。
B．本實驗要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液置于20℃水浴中復溫20分鐘以保證分離溫度。
C．由于各品牌離心機的性能不同，國內南北地區溫度環境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調節離心轉數和離心時間，摸索最佳的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。
D．最好使用無靜電反應的離心管，推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。
E．最優抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑體積。