| 實驗方法原理 |
滑膜細胞是襯于關節內表面的細胞性內膜和內膜下層，分為A型滑膜細胞(滑膜巨噬細胞)和B型滑膜細胞(滑膜成纖維細胞)．其中A型細胞最顯著的功能是吞噬作用和胞飲作用，該型細胞具有吞噬壞死細胞碎屑及病理狀態下關節腔內其他物質的功能；B型細胞的功能是合成輸出蛋白且與透明質酸酶的形成密切相關，同時與透明質酸酶相聯系的小數量蛋白亦來自滑膜成纖維細胞，透明質酸酶參與滑液形成起潤滑作用。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 滑膜組織 |
| 試劑、試劑盒 | Ⅰ型膠原酶 胎牛血清 α-MEM |
| 儀器、耗材 | 手術器械 培養皿 細胞濾網 培養瓶 |
| 實驗步驟 |
一、實驗方法 1. 將切下的組織在手術臺上請護士將標本放入低溫生理鹽水中(靜止)，在手術完成時將標本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。
2. 在超凈臺中將標本放入培養皿中，加入α-MEM 洗滌。
3. 獲得組織切開，仔細辨認于關節反折處及增生的白色光滑的滑膜組織，附于關節軟骨面的增生的血管翳也為滑膜組織(可作另一管消化)，仔細剔除脂肪組織，用α-MEM 洗二次(以去除紅細胞)，放在小青瓶中用解剖剪銳性切碎。
4. 用雙倍獲得組織的體積含有4 mg/mlⅠ型膠原酶的α-MEM 消化37℃孵育120分鐘(在此期間震動混勻數次)。
5. 30 分鐘后收集第一管細胞：細胞懸液經70 um 細胞濾網過濾，用1500-2000轉離心6分鐘，上清為Ⅰ型膠原酶加入未過濾網的組織，繼續用于消化。
6. 離心管底細胞用α-MEM 離心洗滌2 次，每次用α-MEM 重懸浮后用1500-2000 轉，離心6 分鐘，最后一次用記數板觀察到有細胞。細胞最終懸浮于含有10%胎牛血清的α-MEM 中，接種到培養瓶中培養。
7. 60 鐘后收集第二管細胞：細胞懸液經70 um 細胞濾網過濾，用 1500-2000 rpm 離心6 分鐘；用α-MEM 洗2 次，每次用α-MEM 重懸浮后用1500-2000 rpm 離心6 分鐘，最后一次用記數板觀察細胞并計數。細胞最終懸浮于α-MEM 含有10%胎牛血清中，接種到培養瓶中培養。
8. 必要時可做第三管細胞收集；并立即作原代滑膜細胞培養。
9. 每 2-3 天換液一次。
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| 注意事項 |
1. 取材要保證新鮮無菌，可用培養液及冰塊暫時保存，并盡快進行分離 培養。 2. 剪切滑膜組織時應盡量剪碎，以剪碎至1 mm3的小塊為宜。 3. 滑膜組織沖洗盡量仔細，以沖去組織塊上血細胞及脂肪組織等。 4. 補加培養液時應緩緩加入，避免將已貼附的組織塊沖起，導致分離培養失敗。
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| 其他 |
來源《實用醫學細胞培養技術》
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