人線粒體轉錄終止因子3在原核系統和胃癌組織中的表達

人線粒體轉錄終止因子3( hMTERF3)，是人類MTERF蛋白家族的重要成員，可以在大腸埃希菌中原核表達MTERF3蛋白，不少醫藥研發公司提供原核表達服務。原核表達是將動、植物的目標靶基因片段連接至合適的原核表達載體中，并轉化進入原核細胞，隨后利用細菌自身的蛋白質表達系統進行目標蛋白質的重組表達。研究表明hMTERF3可能參與胃癌的發生，進行hMTERF3 mRNA和蛋白質在胃癌組織及正常組織中的表達，可以探討其與胃癌發生、發展的關系。

MTERF3這一因子主要抑制mtDNA的表達，通過減少呼吸酶的產生而降低細胞能量的合成，關于MTERF3的研究可以為糖尿病、心臟病、帕金森等疾病的治療開辟新思路。原核生物表達系統主要包括大腸桿菌表達系統、芽胞桿菌表達系統等，最常用的是大腸桿菌表達系統，因為操作簡單、成本低、基因背景清楚，目的蛋白表達量高。美迪西提供原核表達服務，其科研人員建立了成熟的大腸桿菌表達及純化服務平臺，提供包括各種重組蛋白以及其復合物在大腸桿菌中的表達與純化服務。

為了進一步研究MTERF3蛋白在體內外的功能，構建人MTERF3基因的原核表達載體，獲得高質量的抗體是前體條件。

大腸埃希菌是人體內的一種正常菌群，不但不致病，而且對人體起著保護作用，比如它合成維生素B6和維生素B12，供應細菌自身及人體的需求；它還抑制腸道致病菌的生長繁殖，還可以促進機體免疫系統發育成熟。但也有幾種類型的大腸桿菌可以引起機體發生特異性的腹瀉，如大腸埃希氏菌在人和動物的糞便中大量存在，其中有少數幾種能引起人類食物中毒。

RT-PCR擴增人MTERF3基因cDNA的完整開放閱讀框，克隆至原核表達載體pET28b，轉化大腸埃希菌感受態細胞BL21(DE3)，IPTG誘導6×his融合蛋白質表達，Ni2+-NTA瓊脂糖凝膠柱親和層析純化重組人MTERF3蛋白。以純化的重組蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠制備其特異性多克隆抗體，用ELISA、Western blot和細胞免疫熒光檢測抗體的效價和特異性。

后來成功在大腸埃希菌細胞中原核表達重組人MTERF3蛋白，并獲得高質量的鼠抗人MTERF3多克隆抗體。ELISA結果顯示抗體的效價為1∶105，Western blot和免疫熒光結果顯示鼠抗人MTERF3能特異性識別天然的MTERF3抗原。因此原核表達的重組人MTERF3蛋白具有良好的免疫原性，其免疫小鼠后獲得的多克隆抗體具有高效價和高度的特異性。人MTERF3蛋白的原核表達及多克隆抗體制備為進一步研究人MTERF3的功能奠定了實驗基礎。

2、hMTERF3與胃癌的關系

為了分析hMTERF3 mRNA和蛋白質在胃癌組織及正常組織中的表達，探討其與胃癌發生、發展的關系。分別采用半定量RT-PCR和免疫組化SP法，檢測61例胃癌組織及正常組織中hMTERF3 mRNA和蛋白質表達水平，分析hMTERF3表達與胃癌臨床分期、病理分級、肌層浸潤和淋巴結轉移的關系。

結果發現，hMTERF3 mRNA和蛋白質在胃癌組織中的表達水平顯著高于正常胃組織，hMTERF3蛋白在正常胃組織陽性率為24.6%(15/61)，胃癌組織中的陽性率為86.9%(53/61)，差異具有統計學意義。hMTERF3蛋白的表達與胃癌臨床分期、病理分級、肌層浸潤和淋巴結轉移有關。因此 hMTERF3蛋白的表達異常可能是胃癌發生、發展的分子機制之一，可為預測胃癌的發生提供可能的生物學標志物，也可為胃癌基因診斷和基因治療提供潛在的靶標。