人胃癌高轉移模型的建立實驗

實驗方法原理 用人胃癌組織塊SGC-7901 原位移植于SCID小鼠，第4周末移植瘤向淋巴結和肝臟等器官轉移， 轉移率達66. 7% (2/3) ，第6 周末轉移率高達100% (10/ 10) 。

實驗材料 雄性SPF級SCID小鼠人胃癌組織SGC-7901

試劑、試劑盒 水合氯醛福爾馬林液

儀器、耗材 飼養籠光學顯微鏡石蠟

實驗步驟

一、實驗材料準備

1.  雄性SPF 級SCID 小鼠，6～7 周齡， 體重20～25g 。

2.  裸小鼠皮下傳代的人胃癌組織( SGC-7901，低分化腺癌) 。

二、胃癌高轉移模型建立　

1.  SCID 小鼠25 只， 隨機分為試驗組( n= 15) 和正常對照組( n= 10) 。

2.  試驗組動物原位移植人胃癌組織SGC-7901：用4. 3%水合氯醛將動物麻醉后，依次切開左上腹皮膚、腹壁和腹膜， 仔細暴露胃壁，在胃大彎中部用剪刀損傷胃漿膜層( 直徑約3 mm)，用絲線將人胃癌組織塊( 約5 mm×7 mm，重量為150 mg ) 縫在損傷處，然后將胃送入腹腔內， 用0 號縫線依次縫合腹壁和皮膚。

3.  術后觀察動物麻醉情況，直至全部動物清醒后，送至飼養室。

4.  正常對照組不作處理。

5.  手術后第2、4、6 周末分別隨機處死試驗組動物2、3、2 只， 發現第6 周末2 只動物的癌腫均已轉移，故余下8 只SCID 小鼠也于第6 周末處死。

6.  取胃局部生長的腫瘤組織、腫大淋巴結、腦， 及胸腔、腹腔內臟器， 以10% 福爾馬林液固定，石蠟包埋，常規制片，HE 染色，光學顯微鏡下觀察并記錄腫瘤生長和轉移情況。

其他

一、實驗討論

近年有文獻報道用原位移植方法建立腫瘤轉移模型。原位移植包括原位接種人類腫瘤細胞株，或原位移植人類腫瘤組織塊至裸鼠相應器官兩種方法。原位接種人癌細胞株可提高結腸癌、胰腺癌等少數腫瘤的轉移率，但不能提高胃癌等人類腫瘤在裸鼠的轉移率 。Furukawa 等用人胃癌組織塊原位移植方法建立裸小鼠胃癌轉移模型，發現此法建立的模型癌轉移率高達100% ( 向淋巴結和肝、肺等臟器轉移)； 但對照組用同樣大小組織塊制作細胞懸液再原位接種至胃壁，則癌轉移率僅為6. 7%。此結果表明， 原位移植癌組織塊至裸鼠相應的器官，可能由于保留了癌細胞之間的某些結構，移植癌能較好地反映人類腫瘤的浸潤、轉移特性。SCID 小鼠為重度聯合免疫缺陷小鼠，免疫功能較裸小鼠更為低下，因此更適宜作轉移模型。作者用人胃癌組織塊SGC- 7901 原位移植SCID 小鼠建立轉移模型，發現原位移植后2 周即見癌細胞向肌層和粘膜下層浸潤性生長，4周見淋巴結、肝臟和脾臟等處轉移灶，6 周時腫瘤轉移率高達100% 。這與文獻報道的人胃癌組織原位移植裸小鼠的結果一致，但后者需8～12 周才能達到較高的轉移率。這表明， 在SCID 小鼠上采用癌組織塊原位移植方法， 建立腫瘤轉移模型所需時間短，可為腫瘤轉移研究提供更為理想的動物模型。