[器材和試劑]
● PCR試劑和設備
● cFv基因文庫單鏈模板DNA,制備自pHENl中的天然scFv文庫（10ng/u1）
● Gelleclean試劑盒（Qbiogene）
● Wtzard PCR純化試劑盒（ProlneSa）
● RJHl/2Xho引物： 5'-GGC ACC CTG GTC ACC GTC TCG AGT GGT GGA-3'
● RJH3Xho引物： 5'-GGG ACA ATG GTC ACC GTC TCG AGT GGT GGA-3'
● RJH4/5Xho引物： 5'-GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCG AGT GGT GGA-3'
● RJH6Xho引物： 5'-GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCG AGT GGT GGA-3'
● FdSEQl引物
● pHENl-Vλ3載體DNA（可以根據 MTA）
[方法]
1. 配制4個獨立的50ul PCR反應混合液， 包含：
● 水，35.5ul
● 20XdNTP（每種5mmol/L），2.5ul
● 10XVent聚合酶緩沖液，5.0ul
● FdSEQl引物 （10pmol/u1），2.5ul
● 反向引物（10pmol/u1），2.5ul
● 單鏈scFv模板DNA（10ng），1.0ul
● Vent DNA聚合酶（2單位），1.0ul
2. 在有加熱蓋的熱循環儀內加熱反應混合液到94℃5分鐘。
3. 以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分鐘的條件共循環25次，擴增VL基因。
4. 用Wizard PCR純化試劑盒純化PCR產物。
5. 用XhoI和NotI消化PCR產物；但除了用XhoI替代 NcoI,還需用NEB2緩沖液和BSA,按照廠家要求進行。
6. 用XhoI和NotI消化pHENl-VL3載體DNA;但不要用XhoI替代NcoI.
7. 連接已消化的PCR產物和已消化的載體，并電轉化到大腸桿菌TGl細胞中，構建4個VL基因噬菌體文庫。測定文庫容量并將細菌性文庫材料儲存于-70℃。
8. 用含甘油文庫儲存材料細菌接種到含100ug/ml氨芐青霉素和1%葡萄糖的100ml 2X
TY培養基中，制備每種VL基因文庫DNA.接種量應足夠大以保證接種細菌數至少比文庫容量大5倍。過夜培養后，按標準的DNA質粒制備方法進行操作。為了續后進行文庫消化，可合并不同文庫的DNA。