主要是在出現非特異條帶時可以考慮用降落PCR,在高的退火溫度下做幾個循環,這樣擴出的產物特異性好,可以做為后續反應的模板,然后再溫度較低的情況下以前面擴出來的較特異的產物做模板,這樣不但特異性好,而且產物也夠多,可以出現很好的結果。
還有就是在剛合成引物還未經鑒定效果的時候,可以用降落PCR ,但是正如上面說的你的兩個引物的TM值相差的有點大,一般降落是在TM值以下3-5度開始將,每個循環降0.5或1度,降差不多十個循環后,再維持在最后一個循環的溫度上,不要擔心最后的循環數目不夠,其實只要模板量沒問題,二十個循環足夠了。