數字PCR技術也稱為第三代PCR技術,是一種核酸高靈敏檢測和絕對定量的新方法。
同傳統的PCR相比,數字PCR增加了對反應體系進行分隔(Partition)的操作,將幾十微升的反應體系分隔成了數萬微小獨立反應體系,核酸模板在這種分隔過程中被充分稀釋,理想狀態下每個微滴中含有1個分子的核酸模板,擴增完成后對所有的液滴進行熒光信號識別并計數,計算出陰性和陽性反應的數量,通過泊松分布原理計算靶標分子的濃度。
從而實現靶標分子的絕對定量。數字PCR不依賴標準曲線定量,并且不受PCR擴增效率影響,具有更高靈敏度和準確度。