從正常人和骨關節炎患者關節軟骨分離軟骨祖細胞實驗3

人軟骨

滅菌分化培養基PBSA胰蛋白酶 EDTA:胰蛋白酶（0.05%)和EDTA(0.53mmol L)PBSA配制

離心管 15ml圓錐底的離心管（50 ml)血細胞計數板微量離心器

(a)從培養瓶中吸出生長培養基棄之。

(b)PBSA潤洗后棄去洗液。

(c)加人足量的胰蛋白酶/EDTA覆蓋培養瓶底。

(d)在37℃孵育5?10 min(在顯微鏡下觀察細胞是否脫落)

(e)重懸細胞，置于15 ml離心管中，300g離心5min。

(f)用1ml生長培養基洗滌，轉移至普通器皿或離心管中。

(g)用血細胞計數板對細胞進行計數。

(h)重復離心（620g，10min),棄去上清液。

(i)用分化培養基將其稀釋到1×10⁶個細胞/ml。

(j)按1 ml/管分裝到新Eppendorf管中。

(k)300g離心5 min,上清保留不動。

(l)置于37℃孵箱。

(m)每2?3天更換培養基（見下面的注解1)

(n)培養2?3周軟骨生成（見注解2）

注解

(1)前幾次更換培養基要格外小心，因為只有少量基質將沉淀聚集在一起，操作時很容易分散沉淀。

(2)雖然我們在這里集中闡述的軟骨生成，但適當的培養基也可用來誘導其他表型。無論沉積培養還是單層細胞培養，我們都成功地使牛軟骨祖細胞獲得了成骨、成脂肪和成神經的表型。