伯樂酶標儀的雙抗體夾心法

 但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。    現將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。生物素與親和素的結合具有很強的特異性，其親和力較抗原抗體反應大得多，兩者一經結合就極為穩定。由于一個親和素可與4個生物素分子結合，因此如把ABS與伯樂酶標儀法可分為酶標記親和素-生物素（LAB）法和橋聯親和素-生物素（ABC）法兩種類型。兩者均以生物素標記的抗體（或抗原）代替原ELISA系統中的酶標抗體（抗原）。在LAB中，固相生物素先與不標記的親和素反應，然后再加酶標記的生物素以進一步提高敏感度。在早期，親和素從蛋清中提取，這種卵親和素為堿性糖蛋白，與聚苯乙烯載體的吸附性很強，用于ELISA中可使本底增高。

    從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素則無此缺點，在ELISA應用中有替代前者的趨勢。由于ABS-ELISA較普通ELISA多用了兩種，增加了操作步驟，在臨床檢驗中ABS-伯樂酶標儀應用不多。 如按常法測讀，所得結果將低于實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單抗體制備此類可削弱鉤狀效應。假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。

    用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。采用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的，由于去除了Fc段，從而消除RF的干擾。雙抗體夾心法伯樂酶標儀是否受RF的影響，已被列為這類的一項考核指標。雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。