
從不同的生物或臨床樣本中可以提取的DNA或RNA數量差異很大。例如,雖然少量的DNA或RNA可以很容易地從過量的組織和細胞中純化(例如從幾毫克的組織中),但許多液體活檢樣本可能會產生極少量的DNA或RNA。事實上,每100μL的尿液或血漿等樣品可能產生1-100 ng或更少的DNA或RNA。測得的濃度最常用的技術是在260 nm(A260)處測定吸光度。然而,即使是新一代的分光光度計,該方法的檢出限仍高于2-10 ng/μL。其他技術,例如使用熒光核酸染色劑,已使每μL范圍的ng或sub-ng更低的DNA或RNA定量成為可能。但是,這可能無法完全克服從液體活檢中定量DNA或RNA的困難,因為預期的DNA或RNA產量可能在每μL范圍內較低的pg或sub-pg。
有時候,qPCR實驗會成為阻礙你課題順利開展的強勢攔路虎!看似簡單的基因表達量差異驗證,當遇到低豐富表達的基因時,也許就舉步維艱。模板獲取困難導致的RNA提取量少或RNA質量不佳,即使選用最佳的試劑、篩選出最良好的引物,也有可能qPCR定量得到的內參基因CT值在18-20個cycle,而目的基因在31-35個循環。遇到這種情況,你是怎么解決的呢?

基因的豐度是指基因在基因組中的絕對拷貝數。可分為高豐度,中等豐度和低豐度。低豐度是指目的基因在基因組中的拷貝數低,可簡單認為2ng 總RNA中低于100個拷貝數的基因。從qPCR實驗結果來講,當擴增效率為100%,模板加入量在1-10ng范圍內,qPCR得到的CT值高于28時即可認為低豐度基因。
如何進行低豐度核酸(DNA或RNA)的定量呢?低豐度核酸(DNA和RNA)定量試劑盒。
低豐度核酸(DNA和RNA)定量試劑盒特點和優勢:
定量分析各種濃度的DNA或RNA,包括更低濃度范圍的ng/μL,pg/μL和sub-pg/μL;
與任何Real-Time PCR系統兼容;
通過使用提供的DNA或RNA標準品構建的標準曲線準確定量DNA或RNA。
【測試結果】:
DNA定量的靈敏度:低豐度DNA定量試劑盒與其他方法相比。上圖代表不同DNA定量方法的動態范圍。該試劑盒可以定量從pg和sub-pg范圍內的低豐度樣品中純化的DNA。
使用低豐度DNA定量試劑盒在皮克范圍內進行DNA定量的靈敏度。代表性qPCR基線圖顯示了DNA標準品稀釋梯度的擴增。 可以從低豐度樣品如液體活檢樣品(如血漿或尿液)中定量純化的DNA。使用Norgen的試劑盒可定量至500 fg的DNA。
【測試結果】:
RNA定量的靈敏度:低豐度RNA定量試劑盒(貨號58900)與其他方法相比。上圖代表不同RNA定量方法的動態范圍。該試劑盒可以定量從pg和sub-pg范圍內的低豐度樣品中純化的RNA。
使用低豐度RNA定量試劑盒在皮克范圍內進行RNA定量的靈敏度。代表性qPCR基線圖顯示了RNA標準品稀釋梯度的擴增。可以從低豐度樣品如液體活檢樣本(如血漿或尿液)中定量純化RNA。可以定量低至500 fg的RNA。