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  • 發布時間:2023-06-05 10:43 原文鏈接: 體液免疫功能檢查B細胞數目及功能的檢測

      原發性免疫缺陷和繼發性免疫缺陷均可導致體液免疫功能下降。原發性體液免疫功能缺陷可能由于B細胞分化障礙,細胞內合成Ig功能紊亂或由于抑制性細胞功能過強。繼發性體液免疫功能降低可能由于蛋白質大量丟失,蛋白質吸收障礙、營養不良、免疫抑制治療的副作用,病毒感染(艾滋病)等。在診斷原發性體液免疫功能缺損中可檢查B細胞的數目和功能以確定造成缺損的原因。

      1.外周血B細胞數目的檢測首先進行常規的外周血白細胞總數和分類計數檢查,這些結果是評價病人免疫系統功能狀態的基本資料。由于在全血中淋巴細胞所占比例很少,而T細胞和B細胞不能藉形態學特征分類,所以外周血B細胞數檢測需先從全血分離出富含淋巴細胞的單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBM)。再依靠B細胞表面有免疫球蛋白分子或其他特征來檢查B細胞。常用的方法是將待檢者的PBM用FITC標記的免疫抗人Ig作直接免疫熒光染色,在熒光顯微鏡下顯熒光的細胞為帶有表面免疫球蛋白的B細胞。正常人B細胞的約占PBM的10%。

      2.外周血B細胞功能的檢測 分離受檢者血液PBM細胞,體外培養時加入B細胞刺激物如RWM(美洲商陸刺激素)或SAC(金黃色莆萄球菌來源的刺激物)后由B細胞變成Ig分泌細胞的數量。體液免疫功能缺損患者,其PBM對PWM和SACA刺激的反應降低,產生Ig分泌細胞數正常人顯著減少。在進一步檢查這種免疫缺損的原因,則應檢查是由B細胞或TH細胞缺損所致,還是由于TS細胞數量或活性增強引起的。

      抗體形成細胞計數:檢查人類Ig分泌細胞是用反向溶血空斑檢測(reversed hemolytic

      plaque assay)法。將待檢人的PBM、用SPA包被的SRBC(SPA-SRBC)、兔抗人Ig抗體、補體四種成分混合,灌入用兩張玻片做成的小室,密封好,放入溫箱培養1-3小時,,在此期間,作為抗人Ig抗體的免疫IgG的FC段可與SRBC表面SPA結合,當Ig分細胞分泌出游離的Ig分子時,這些人Ig分子與SRBC表面的抗人Ig抗體結合形成免疫復合物,即可活化補體,使SPA-SRBC溶解,因此在Ig分泌細胞周圍形成一個圓形的溶血區,稱為溶血空斑,每一個溶血的空斑就代表一個Ig分泌細胞。

      檢查小鼠Ig分泌細胞應用的溶血空斑試驗比較簡單,即SRBC免疫注射小鼠,4天后取脾制成單個細胞懸液,加入一定量SRBC(靶細胞)混合,在補體參加下,產生抗體的細胞分泌出的Ig與SRBC(抗原)結合在補體作用下,溶血,表現肉眼可見的溶血空斑。計數空斑數代表分泌抗體的細胞數。

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