實驗材料 核苷酸
試劑、試劑盒 SSC焦磷酸鈉SDS
儀器、耗材 培養箱水浴鍋
實驗步驟
1. 制備雙份的轉印細菌菌落或噬斑的硝酸纖維素濾膜（處理和干烤過）。
2. 在室溫下用3× SDS / 0.1%SDS溶液500 ml 洗膜3~5次。
3. 然后在65℃洗膜至少1.5 h 以上直至過夜。
4. 在預雜交液中37℃預雜交1 h。
5. 在裝有20 ml 以上的SSC雜交液的可封口的雜交袋中可移入多達20張的濾膜。
6. 在毎 個雜交袋中每毫升雜交液加入0.125 ng 至1.0 ng 的每種32P標記的寡核苷酸。
7. 在以下給定的溫度條件下寡核苷酸雜交14~48 h。
（1）14 堿基——室溫
（2）17 堿基——37℃
（3）20 堿基——42℃
（4）23 堿基——48℃
8. 從雜交袋中取出濾胰，用6×SSC / 0.05%焦磷酸鹽洗膜液在室溫冼膜3~5次，每次 5~15 min。
9. 再用預熱的洗膜液洗膜30 min。預熱溫度與寡核苷酸片段長度有關。
（1）14 堿基——37℃
（2）17 堿基——48℃
（3）20 堿基——55℃
（4）23 堿基——60℃
10. 如果濾膜高于本底放射性活性，則需要將洗膜溫度升高2~3℃，并延長洗膜15~ 30 min。
11. 重新作放射自顯影檢測。但不得超過以下對應的溫度：
（1）14 堿基——41℃
（2）17 堿基——53℃
（3）20 堿基——63℃
（4）23 堿基——70℃
12. 用塑料薄膜包裹濾膜，放好，使用增感屏在-70℃對X光片曝光14~72 h，雙份濾膜均對X光片曝光，如果在同一位置出現曝光點，那么該位置對應的細菌菌落或噬斑為陽性。