使用流式細胞儀檢測病毒

　　流式細胞術是一種通常用于從混合樣品中識別和分離特定細胞的技術。這種技術可以應用于大量的樣品篩選，這對于進一步的統計分析是非常理想的。流式細胞儀已用于檢測病毒，該技術被人們稱為“流式病毒儀”。

　　此外，流式細胞術已被用于根據感染性的不同對病毒顆粒進行分類，以及檢測被病毒感染的細胞。

　　“流式病毒分析”是如何發展成為一種技術的？

　　流式細胞儀通過測量細胞通過激光束時的光散射和發出的熒光來測量單個細胞。最初認為通過流式細胞技術無法檢測到明顯小于細胞的病毒。

　　但是，通過修改流式細胞儀并使用較小的體積進行觀察，可以通過流式細胞技術檢測病毒。這項技術早在2013年被科學家稱為“流式病毒分析”。

　　使用流式細胞技術成功檢測到病毒的第一個例子是T2噬菌體，其寬度為70nm，長度為200nm。在這些早期研究中，病毒顆粒固定在戊二醛或甲醛中。隨后，還通過這種流式細胞儀檢測了痘病毒和固定的T4噬菌體，并將該技術進一步應用于檢測和計數海洋樣本中的病毒。

　　樣品處理必須格外小心，包括固定和標記病毒的步驟，以及加熱以改善染料滲透性的步驟。

　　在最初的研究中，有些病毒被證明更難檢測，例如球形呼腸孤病毒。然而，近年來，使用流式細胞技術檢測病毒已變得越來越普遍，并且可以通過流式細胞術檢測的病毒范圍已擴大到包括λ噬菌體，單純皰疹病毒，小鼠肝炎病毒，人類免疫缺陷病毒（HIV） ），尼帕病毒，朱寧病毒，牛痘病毒，登革熱病毒和人巨細胞病毒。

　　流式病毒測定方法舉例

　　在一項研究中，布魯薩德（Brussaard）使用流式細胞儀檢測多種病毒；其中包括HIV，單純皰疹病毒和脊髓灰質炎病毒。將這些病毒與適當的宿主細胞一起培養，然后將感染的細胞裂解。

　　通過離心從細胞裂解物中部分純化了一些測試的病毒，包括HIV和單純皰疹病毒。然后將樣品用戊二醛固定，然后使用液氮冷凍。

　　然后用各種靶向核酸的熒光染料對固定的病毒樣品進行染色，SYBR Green I，SYBR Green II，OliGreen和PicoGreen。然后將樣品通過帶有氬離子激光器的流式細胞儀。

　　研究表明，SYBR Green I的熒光強度最高，通過這種流式病毒測定法可以檢測到DNA基因組為48.5至300千堿基的病毒。能夠在檢測極限時檢測到具有較小RNA基因組的病毒。此外，研究表明該方法可以區分不同的病毒。

　　如何使流式病毒技術在研究中受益？

　　流式細胞儀的發展使得可以檢測胞外囊泡，這也有屬于流式病毒測定領域。流式細胞儀的一種適應方法是增加激光的功率，這有利于檢測病毒以及囊泡。如果樣品中元素的波長小于所用光的波長，則樣品不能很好地折射光。通常，流式細胞儀使用10至20mW的激光器，但使用300mW的激光器意味著可以避免上述問題。

　　病毒和細胞外囊泡的一個共同特征是它們的體積小，這意味著光子分布更廣泛。大多數流式細胞儀通過檢測前向光散射來測量細胞大小，通常覆蓋范圍為0.5?至15?。然而，從較小的病毒或外來小泡中散射的大部分光都不會被檢測到。流式細胞儀的適應性可以檢測15?至70?之間的光，而阻擋0.5?至15?的光，這在流式病毒測定技術的發展中很有用。

　　可以通過流式細胞儀檢測病毒的感染性嗎？

　　研究表明，病毒顆粒上某些脂質或蛋白質的存在及其豐富程度與病毒顆粒的感染性有關。高丁公司研究了流式細胞儀是否可用于檢測單個Junin病毒顆粒的差異。

　　他們發現病毒顆粒的大小和膜糖蛋白的濃度與病毒顆粒的感染性之間存在相關性。這可以通過在流式細胞儀分析之前標記膜糖蛋白來實現，這可以根據病毒的感染力來區分病毒顆粒。

　　可以使用流式細胞技術檢查細胞是否已被病毒感染嗎？

　　在一項研究中，Sivaraman和他的同事研究了是否可以使用特定的細胞標記物鑒定脊髓灰質炎病毒感染的細胞。在這里，使用了TAT肽衍生的分子信標，該信標被傳遞到受感染的細胞中，并將其與流式細胞儀相結合，他們能夠鑒定出脊髓灰質炎病毒感染的細胞。這有可能被進一步開發為快速診斷病毒感染的工具。