一、材料與試劑
1. 抗體
(1)鼠抗人CD56FITC(BD,340410)
(2)鼠抗人CD2FITC(BD555326)
(3)鼠抗人CD19FITC(555412)
(4)鼠抗人CD14PerCP(Invitrogen,MHCD1431)
(5)鼠抗人CD16PacBlue(BD,558122)
(6)鼠抗人HLA-DRAPC-Cy7(BioLegend,307617)
2. 其他材料
(1)帶K3EDTA的玻璃全血管(BDVacutainer366450)
(2)10×BDFACS裂解液(BDPharmigen349202)
(3)20%甲醛(Tousimis1008A)
(4)PBS(CalciumandMagnesiumfree,Gibco20012-027)
(5)5 mL 聚丙烯管(BDFalcon352063)
二、儀器
1. BDLSRII流式細胞儀
三、步驟
1. 將人血加入到帶K3EDTA的玻璃全血管,然后輕搖幾次混合血液。
2. 將100 ul 全血加入到5 mL 的聚丙烯管,并貼上標簽。
3. 取各種抗體5 uL 到血樣中,輕拍管混合血樣。
4. 室溫,黑暗孵育樣品。
5. 加入2 ml 1×BDFACS裂解液(10×Solution dilutedin ddH2O)
6. 混勻樣品三次,離心2~3 min。
7. 室溫,1 200 rpm 離心7 min。
8. 除去上清,用200 ul 2%甲醛重懸沉淀。
9. BDLSRII流式細胞儀檢測樣品。
10. 使用FlowJo分析數據。(TreeStar,Inc)