使用超高效合相色譜系統測定甲糖寧色譜含量

　　使用超高效合相色譜(ACQUITY UPC2?)系統測定甲糖寧(tolbutmide)色譜含量

　　目的

　　利用沃特世(Waters?)ACQUITY UPC2?系統，成功地將測定甲苯磺丁脲藥物含量的美國藥典正相HPLC方法轉換為超臨界流體色譜方法。

　　背景

　　超臨界液體色譜(SFC)是一種正相色譜分離技術，其使用CO2作為主要流動相，通常使用極性溶劑(如MeOH)作為改性劑。由于SFC的原理與HPLC 的原理相似，因此，目前的方法應該能夠轉換成SFC方法，從而減少溶劑的用量和處理，降低每次分析的成本，同時增強環境方面的保護。轉換成SFC的色譜方法必須保持數據質量，而且必須得到與目前正相色譜方法一致的實驗結果。目前，美國藥典(USP)規定了含有甲糖寧(苯磺酰胺，CAS # 64-77-7)藥物的正相HPLC方法。利用4.0 x 300 mm的硅膠柱(L3)進行等度分離，流速1.5mL/min，流動相為475:475:20:15:9的正己烷：水飽和的正己烷溶液：四氫呋喃：冰醋酸的混合溶液，運行時間約為20分鐘。如大多數藥典中的方法一樣，本方法經過驗證且可靠。但是，分析過程使用了含有正己烷和四氫呋喃的復雜流動相混合溶劑。出于環保和成本的原因，許多實驗室都希望杜絕這些溶劑的使用。

　　這種新型的超高效合相色譜(UPC2?)方法得到的數據與目前的HPLC方法相當，甚至更好，速度是目前的HPLC方法10倍，且消耗的溶劑更少。

　　解決方案

　　將甲糖寧與內標物甲糖寧混合，利用目前USP方法制備和分析樣品。分析結果與使用ACQUITY UPC2方法得到的結果進行對比。UPC2方法的條件如下：

　　色譜柱： ACQUITY UPC2 BEH，3.0 x 100 mm，1.7微米

　　溫 度： 50 °C

　　流動相： 95% CO2:5%甲醇/異丙醇 (1:1)，含 0.2% TFA

　　流 速： 2.5 mL/min

　　背 壓： 120 Bar/1740 psi

　　檢測器： UV /PDA ，254 nm

　　目前的正相HPLC方法，獲得仍可接受的色譜分離(見圖1)，雖然內標物色譜峰拖尾嚴重(拖尾因子1.65)。由于已經通過了所列出的適應性標準(重復進樣的相對標準偏差不超過2.0%;妥拉磺脲和甲糖寧的分離度R不小于2.0)，因此也沒有再作進一步的改進。

　　由新開發的UPC2方法得到的結果，同樣符合美國藥典適應性的要求(甲糖寧和妥拉磺脲的保留時間RSD值分別為1.2%和 0.9%，兩個化合物的面積RSD值小于0.90%，n=6)，保持兩個目標化合物間分離度(R = ~15)的同時，運行時間大大縮短。內標物妥拉磺脲拖尾現象得到大大改善(拖尾因子1.2)。需要注意的是，利用UPC2從混合物中分離并檢測出許多小峰，說明了本方法具有很高的分離效率。本例中，每次正相HPLC分析大約使用29mL正己烷和各少于1mL的四氫呋喃和乙醇。相比之下，UPC2方法中每次進樣大約使用0.25mL的甲醇和異丙醇。這說明，通過將正相HPLC方法轉換為UPC2方法，可以大大地減少有機溶液的使用。根據目前的溶劑價格，每次正相HPLC分析的成本大約是1.40美元，而每次UPC2分析的成本大約是0.01美元，說明通過將正相HPLC方法轉換為UPC2方法可以大大地降低成本。

　　總結

　　使用ACQUITY UPC2，可以成功地將美國藥典的HPLC方法轉換為UPC2方法。這種新的UPC2方法得到的數據與目前的HPLC方法相當，甚至更好，速度是目前的HPLC方法的10倍，并且消耗的溶劑更少。我們以更快的速度得到高品質的分析數據，使實驗室生產率提高，每個樣本的分析成本降低。對于希望將目前的正相HPLC方法轉化為更高效、更省錢方法的實驗室而言，ACQUITY UPC2系統是一種理想的解決方案，同時也增強了健康、安全和環境方面的保護。

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