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  • 發布時間:2022-11-27 12:54 原文鏈接: 信使RNA的提取、分離和純化

    真核細胞的mRNA分子最顯著的結構特征是具有5’端帽子結構(m7G)和3’端的Poly(A)尾巴。絕大多數哺乳類動物細胞mRNA的3’端存在20-30個腺苷酸組成的Poly(A)尾,通常用Poly(A+)表示。

    這種結構為真核mRNA的提取,提供了極為方便的選擇性標志,寡聚(dT)纖維素或寡聚(U)瓊脂糖親合層析分離純化mRNA的理論基礎就在于此。mRNA的分離方法較多,其中以寡聚(dT)-纖維素柱層析法最為有效,已成為常規方法。

    此法利用mRNA 3’末端含有Poly(A+)的特點,在RNA流經寡聚(dT)纖維素柱時,在高鹽緩沖液的作用下,mRNA被特異地結合在柱上,當逐漸降低鹽的濃度時或在低鹽溶液和蒸餾水的情況下,mRNA被洗脫,經過兩次寡聚(dT)纖維柱后,即可得到較高純度的mRNA。寡聚(dT)纖維素柱純化mRNA。

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