九、選擇合適的抗體
至今為止，應用于臨床的常用抗體有幾十種，在這當中又可分為兩種類型。
1.濃縮型抗體
根據近幾年來使用的情況認為，它有許多優點，但也有許多不足之處：
①可作為各種疾病檢測的常備抗體。在各單位的常規活檢診斷中，有常見的病例，也有罕見的病例，尤其是后者，有時很長時間才遇到一例，這就給抗體的應用和備用提出了更高的要求，如除了常用的抗體外，還需備用一些較為罕見病例的抗體。這樣才能解決臨床的診斷問題，如臨時購買，則需較長的時間，這樣就會延誤診斷。實踐證明：濃縮型抗體，可作為常備檢測抗體。當購買抗體后，根據檢測病例的數量，在無菌的條件下，將抗體分成小包裝，然后用蠟膜封起來，于－30℃的低溫冰箱中保存，臨用時取出一支，用指溫促其回升至室溫，然后用PBS稀釋即可使用，這種抗體可保存3年左右。
②成本低，價格較便宜。
它與即用型的抗體相比較，價格要便宜好多，如以某公司2002年-2003年的CK為例，濃縮型的抗體0.1ml，價格260元，該抗體可稀釋為5000ml，以每張切片所需抗體為50ul計，可標記100例，每例一抗體所需2.6元，而即用型抗體1.5ml，價格150元，可標記30例，每例一抗體需5元。
③需要稀釋抗體，手續較為復雜。 對于新購入的濃縮型的抗體，使用時必須將稀釋為工作液，才能使用，對于從未用過的抗體，還必須實驗其實際的稀釋度，因為各種抗體，廠家都做了相應的稀釋度的實驗，但這是大概的稀釋度，要使抗體真正適合于本單位的稀釋度，就必須對抗體的稀釋度進行實驗，如1:100.1:75.1:50.1:25等，如果結果在1：50上是最佳結果，這就是最佳的稀釋點，如果在這范圍內找不出最佳稀釋點，則應繼續實驗直到找出最佳稀釋點為止。
④需要配置各型號的微量加樣器，以利于量取精確的抗體量。
⑤需要具備一定的英語水平，因為濃縮型的抗體多為進口試劑，其使用書都以英文為主，其中涉入抗體的來源，適應讓稀釋對什么組織或細胞可起反應等。
2.即用型抗體。
近幾年來，免疫組化技術應用的推廣，即用型抗體的應用越來越受到人們的歡迎，根據幾年來的使用，認為它有許多優點和不足：
①使用方便。對于初學者來說，它是一種最好的抗體，不管什么樣的病例和切片，只要有抗體，不需要自己摸索稀釋度，拿起試劑瓶一滴即可，極不方便。
②對于不具備或基本不懂免疫組化技術的人，只要按照說明書的方法使用，也能獲得理想的結果。
③不需要配置多種昂貴的微量加樣器。現今的微量加樣器，如為進口貨，貴者多達兩千多元。而即用型抗體無需再行稀釋，即買即用，無需配備其余器械。
④特別適合于基層單位。基層單位，無需多大的投資，就能開展免疫組化的工作，這對于提高診斷的準確率，極有好處。
⑤價格較濃縮型抗體貴。
⑥即用型抗體不可作為常備貯存抗體。即用型抗體，一般有效期為一年。如果用量大的單位，對于3ml一個包裝的抗體，一年需要用幾支，這對抗體來說，不會造成浪費。但如果為較小的單位，一年中標記的病例較少，購買抗體時也盡量選小包裝的抗體，如1.5ml。如果碰上罕見的病例，有時一年也標記不了幾例，這樣就應采用濃縮的了。即用型的抗體，有效期為一年，但真正購買到的抗體使用期就不可能為一年，因為抗體從生產商到銷售商的手里，需要一定的時間，如果運氣好的話，你購買到的抗體，是剛交到銷售商的手里，那么，使用的時間可能長些，但如果在銷售商的手中滯留了一段時間，抗體的有效使用期就可能不會太長，五個月、六個月或者三個月。如果在有效的時間內不能使用完。稍為超過一些時間還可以，如果時間過長，就應當丟棄，因為會影響標記的質量。有人抱怨，剛買的抗體標記很好，后來就漸漸不好了。這是因為隨著時間的延長，抗體的活性會逐漸失去生物活性，導致了標記質量的下降。
（2） 抗體的適應癥。
在眾多的抗體中，按它們的實際使用范圍，把它們分為兩個類：
1.適合于冰凍切片，涂片，細胞培養片。
2.適合于石蠟切片，冰凍切片，涂片和細胞培養片。
（3）選擇合適的單克隆或多克隆抗體。
抗體除了分為上述的兩個類外，從其克隆的高度講，也有單克隆和多克隆之分。
1.單克隆抗體，在目前臨床常用的抗體當中，大部分都是單克隆抗體。這要歸功于生物技術的不斷提高。在早些時候，應用于臨床的抗體，大多數為多克隆抗體。
2.多克隆抗體，在臨床應用的抗體中，還有少部分的抗體為多克隆抗體。
（4）抗體的加入。
這看似很簡單的問題，如果處理不好也可導致不同的結果，如果應用自動免疫組織化學染色儀，將程序輸入即可，如為手工操作，就必須注意以下的問題：
1.當PBS沖洗完畢后，在加入抗體，如一抗，二抗或三抗。必須將存留于切片上的多余的PBS摔干，但不能讓切片干涸，切片干涸，往往可產生非特異性染色，切片上PBS存留過多，將會稀釋加入的抗體，影響加入抗體的濃度，同時也將影響最后的結果，如假陰性等。
2.加入的抗體以一滴為佳。
當擦干組織塊周邊多余的PBS后，切片保持著一定的濕潤度，此時加入另外的抗體為最佳時候，滴入抗體以一滴50ml為好，加入后，輕微地搖勻地覆蓋于切片上，使最后的結果穩定均衡，不至于有的地方有反應，有的地方無反應。
3.切片沒擦好將會影響加入抗體的質量，切片沒沖洗干凈，沒擦試好，當加入抗體后，它可縮于切片的一邊，此時你為了使加入的抗體能夠完全地覆蓋整個切片，便會使勁地加入抗體，此時的結果是，抗體依然滑向一邊，或者完全露出，這不光沒達到目的，還浪費抗體，正確的做法就是徹底地用PBS沖洗，摔干切片擦干切片周邊的PBS，再滴入一滴抗體輕輕搖勻即可。
（5）選擇合適的孵育時間。
第一抗體的孵育時間，有較多的使用范圍，應用于臨床檢測抗體的孵育時間。一般室溫下孵育在30-60分鐘，120分鐘，對于研究性質的抗體孵育時間，也可按照上述的時間，但也有人提出于4℃冰箱中過夜孵育，根據我們的經驗一般不主張于4℃冰箱中過夜，原因是：
1.長時間的孵育可以使一些非特異性的物質沉淀下來，或者被吸附，造成背景的染色。
2.目前銷售的抗體，純度較高，特異性較強，不需要長時間的孵育，也能夠結合得很好 。
3.長時間的孵育，較容易引起切片的脫落，造成染色的失敗。
4.長時間的孵育，不利于臨床病理報告的發出。