1. 古茲菲德-雅各氏病（CJD）病人的尸解腦組織，4％ 中性甲醛固定，石蠟包埋，連續切片，厚 5 μm（貼片前的載玻片應預涂不含有熒光色素的黏合劑）。
2. 常規脫蠟，水化。
3. 抗原修復（檸槺酸鹽緩沖液 pH 6.0 中，高壓滅菌器加熱 100℃，20 min）及 96％ 甲酸孵育 2 min，PBS（pH 7.4，0.01mol/L）洗。
4. 滴加一抗（抗 PrP McAb 12F10），1:300，室溫，60 min。
5. PBS 洗 5 min×2。
6. 滴加熒光素標記的羊抗鼠 IgG（Alexa Fluor 488-GAM IgG）1:200，室溫 30 min。
7. PBS 洗 5 min×2。
8. 正鼠血清封閉（1:10，室溫 30 min），PBS 洗。
9. 滴加配對一抗（SMI-31 McAb 1:2500；SMI-32 McAb 1:100；AP20McAb 1:250；SY-38McAb 1:10；抗-突觸蛋白 1PcAb 1:25；M12.13 McAb1:25；抗-GFAPPcAb1:2000；CR3/43 McAb 1:50 及抗-泛素 PcAb 1:100 等），室溫，60 min。
10. PBS 洗 5 min×2。
11. 滴加熒光素標記的羊抗鼠或羊抗兔 IgG（AlexaFluor568-GAM 或-GARIgG）1:200，室溫 30 min。
12. PBS 洗 5 min×2。
13. 10％ 緩沖甘油或明膠甘油封片。
14. 熒光顯微鏡觀察，顯影（濾色片分別為 488 nm 及 568 nm）。結果：第一重抗原（PrPTSE）陽性產物呈亮綠色熒光，第二重配對抗原陽性產物呈橘紅色。 展開 | 