試劑、試劑盒 石蠟切片
實驗步驟
1. 石蠟切片（貼片前的載玻片應預涂不含有熒光色素的黏片劑），厚 5 μm，常規二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，人 PBS（pH 7.4，0.01 mol/L）。
2. 1％ 人血清白蛋白（HSA）孵育 10 min（亦可用 10％ 正常羊血清代之），不洗。
3. 抗 ACTH 血清（McAb）1:200，孵育 30 min，37℃，濕盒。
4. 0.05 mol/L TBS（pH 7.4，內含 1％ Triton X-100，下同）洗，10 min×3。
5. 羊抗鼠 IgG-TRITC 1:100，濕盒，室溫避光反應 1 h。
6. 0.05 mol/L TBS（pH 7.4）洗 10 min×3（第一重 ACTH-TRITC 標記染色已完成）。
7. 切片逐級乙醇脫水，二甲苯透明，空氣干燥后，置于裝有多聚甲醛粉末的密閉容器內，放在 80℃ 烤箱或溫箱內以甲醛蒸氣固定 2～4 h，使第一重染色中二抗的不飽和抗原結合部位（Fab）失活。
8. 切片以 TBS 洗 5 min×4。
9. 1％ HSA（或 10％ 正羊血清）孵育 30 min，室溫，濕盒，不洗。
10. 抗 GH 血清（McAb）1:400，孵育 30 min，37℃，濕盒。
11. 0.05 mol/L TBS（pH 7.4）洗 10 min×3。
12. 羊抗鼠 IgG-FITC 1:100，濕盒，室溫避光反應 1 h。
13. 0.05 mol/L TBS（pH 7.4）洗 10 min×3（第二重 GH-FITC 標記染色完成）。
14. 緩沖甘油封片。熒光顯微鏡下分別以 546 nm 及 490 nm 波長的激發光觀察切片組織內 TRITC 及 FITC 所標示的 ACTH 及 GH 抗原（TRITC-ACTH 陽性細胞呈紅色，FITC-GH 陽性細胞呈亮綠色）。
15. 觀察及攝影。用彩色底片對切片同一部位用 546 nm 及 490 nm 波長激發光分別作兩次曝光，即可在同一張照片上顯示不同顏色標示的 ACTH 與 GH 兩種抗原。