9. 在一新1.5mL 離心管中加入 900μL 預冷 無水乙醇、20μL 3M的醋酸鈉。將步驟8的上清小心加入本步驟離心管中。顛倒數次混勻。12000rpm 4℃ 離心15分鐘。（提示 吸取步驟8中的上清時，千萬不要將有機相吸入，寧可放棄一些上清，否則影響后面的連接反應。 另外，本方法使用的醋酸鈉量較小，但足夠沉淀核酸，并且無需洗鹽。）
10. 棄上清，將離心管導致于干凈吸水紙巾上5分鐘。室溫下吹風干燥。（提示 可將試管至于超凈臺吹風干燥。 如果管底有較多液體聚集，可蓋好管蓋后，輕彈管底數次，將液體分散掛在管壁上，再打開管蓋吹風）
連接
向回收DNA的試管中加入8μL 雙蒸水，蓋緊，彈擊管底使液體盡量接觸管壁。瞬時離心將液體甩到管底，再加入1μL ligase
Buffer，1μL T4 ligase（連接酶）。彈擊管壁混勻，瞬時離心將液體甩到管底。 置4℃過夜。 （提示 Ligase
Buffer應該在首次融解后分裝，每管可2-3μL，-20℃存儲。 4℃過夜可獲得最多的轉化克隆 。）
三、 一步法感受態細胞制作 （已經檢驗過DH5α和BL21系菌，采用此方法的轉化效率足夠高）
來自Nucleic Acid Research 1988 16 3580
Rapid and Convenient method for the preparation and storage of competent bacterial cells.
Chung CT, Miller RH.
下載鏈接：http://www.pubmedcentral.gov/pagerender.fcgi?artid=336520&pageindex=1
（提示：建議首次使用本方法時，先培養20mL菌，可得到總數2mL的感受態菌，足夠作30次轉化。制作感受態細胞時注意無菌操作。）
1. LB medium 培養至 OD值 0.3-0.5。
2. 4℃ 3000g（或6000rpm） 5分鐘。棄上清，收菌。
3. 重懸于原培養體積1/10的TSB中。
4. 冰上置10分鐘。 分裝，每管60μL，置冰上。放入－70℃冰箱。（提示 每次使用拿出一管，避免反復凍融。 －70℃可保存一年不影響轉化效率）
TSB配方（需高壓）：
LB （PH6.1）
10% PEG 3350
5% DMSO
10mM MgCI2
10mM MgSO4
10％ 甘油
* TSB 的配置同原文稍有改動，即把甘油加入TSB并一起高壓（簡化步驟）。實踐數次證明對于感受態制備沒有影響。
5×KCM溶液配方：（配置數毫升即可，－20 ℃保存，可反復凍融）
0.5 M KCI
0.15M CaCl2
0.25M MgCI2
轉化Protocol：