本文采用免疫親和柱凈化結合柱后電化學衍生-HPLC方法，檢測了玉米及花生醬中的4 種黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2。4種黃曲霉毒素在0.1~10μg/L內線性相關系數R2>0.99998，檢出限（按S/N = 3計算）為0.004~0.007μg/L。以10μg/L 黃曲霉毒素標準溶液為考察對象，連續6 針進樣，得出4種黃曲霉毒素的保留時間相對標準偏差RSD<0.1%，峰面積RSD<0.3%。實驗證明，該方法可有效用于玉米及花生醬等樣品中黃曲霉毒素的測定。
黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉的代謝產物，廣泛存在于自然界中。最常見的黃曲霉毒素有B1、B2、G1、G2等，其中B1 毒性最強，G1次之，B2、G2較弱。由于黃曲霉毒素的強毒性和強致癌性，許多國家和組織機構均規定了食品中的黃曲霉毒素的限量值。其中，歐盟規定了堅果、玉米、果脯等農作物中黃曲霉毒素B1 的含量不得超過2.0~8.0μg/kg，B1、B2、G1和G2的總量不得高于4.0~15.0 μg/kg。美國FDA分別規定了食物和動物飼料中的4種黃曲霉毒素的總量不得超過20μg/kg和300μg/kg。因此，建立準確、有效的黃曲霉毒素的測定方法非常重要。
由于農作物和食品中的黃曲霉毒素含量都比較低，樣品基質非常復雜，免疫親和柱凈化結合柱前（后）衍生、HPLC-FLD 檢測的方法越來越多地應用于各種樣品的分析。本文綜合考慮色譜峰柱后擴散、分析速度、分離度及靈敏度，建立了免疫親和柱凈化-柱后電化學（Br2）衍生快速測定黃曲霉毒素的HPLC-FLD 方法，并成功并用于玉米和花生醬中的黃曲霉毒素的分析。
實驗部分
儀器及裝置
Agilent 1260 Infinity液相色譜系統，包括溶劑架，四元泵（內置脫氣機），標準自動進樣器，柱溫箱，熒光檢測器。拜發公司KOBRA電化學衍生裝置，包括電化學衍生池、可變控制電源、0.5mm內徑PEEK管（至少34cm）等。
HPLC方法
色譜柱：Zorbax Eclipse Plus C18，4.6mm×150mm×5μm；
柱溫：40℃；
流動相A：1L水，加入238 mg 溴化鉀和700μl 4M硝酸；
流動相B：甲醇；
等度：A/B = 50/50，12 min；
流速：1.0 ml/min；
檢測：熒光, Ex為362 nm, Em為455 nm，gain=15；
進樣量：20 μl；
電化學衍生池電流：100μA；反應管：0.5 mm i.d×34 cm PEEK 管（從衍生池出口到熒光檢測器入口）。
樣品前處理方法
稱取25g待測樣品于高速勻質器中，加入2g氯化鈉和125 ml甲醇/水（60/40, V/V），高速攪拌勻質1 min 后，加入125 ml去離子水稀釋提取液。手動混合均勻后，立即取40~50 ml該提取液過Whatman No.4 濾紙，取濾液10 ml（相當于1g樣品）上樣于預先活化好的AFLAPREP免疫親和柱（活化程序參考親和柱說明書），以2~3 ml/min 流速流過免疫親和柱，再用10ml去離子水沖洗免疫親和柱并抽至近干。精密移取1 ml甲醇于免疫親和柱，以手動方式，用2 ml注射器將甲醇緩慢推過免疫親和柱（必要時，可用甲醇反沖免疫親和柱以保證黃曲霉毒素完全洗脫），完全收集洗脫液，并用1 ml去離子水稀釋洗脫液，混勻后過0.22μm 濾膜，待測。
方法線性范圍、檢出限和精密度
分別配制0.1、0.25、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/L 四種黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 的混合標準溶液（稀釋劑為MeOH/H2O =50/50），按上述HPLC 方法分析，以峰面積對濃度作圖，得出四種黃曲霉毒素的線性擬合曲線相關系數R2>0.99998，線性擬合方程見圖1。按信噪比S/N = 3 計算，得出B1、B2、G1和G2的檢出限分別為0.007、0.004、0.006和0.005μg/L，連續6 次10μg/L標準混合溶液考察方法精密度，得出4種黃曲霉毒素峰面積RSD<0.3%，保留時間RSD<0.1%。6針10μg/L標準混合溶液疊加色譜圖和0.1μg/L混標色譜圖如圖2所示。表1比較了本文方法和常見標準方法的檢出限，發現本文方法可完全滿足現行國內外標準的要求。
小結
本文通過柱后電化學衍生-熒光檢測方法，進一步提高了黃曲霉毒素G1 和B1 的檢出限。在保證4 種黃曲霉毒素分離度的前提下，將黃曲霉毒素的保留時間縮短至8min之內（為保證樣品組分完全洗脫，實際樣品分析時間為12min）。同時為去除樣品中干擾組分，采用免疫親和柱凈化樣品，效果明顯。實驗證明，該方法可用于實際樣品中痕量黃曲霉毒素的準確測定。