基 本 方 案 構 建 MHC I-Ig 二聚體材 料編碼目的 M H C I 類分子的 c D N A 及合適的引物 M Z w I 和 X k I 限制性內切核酸酶及緩沖液(N e w England Biolabs) T A 克 隆 試 劑 盒(Invitrogen),可選 p X I g 質 粒(可向作者索取) 10X T 4 D N A 連接酶緩沖液,添 加 5m m o l / L A T P I Weiss 單位/M1 的 T 4 D N A 連 接 酶(Life Technologies) L B 平 板 ,含 50M g/m l 氨芐青霉素和 30M g/m l 卡那霉素 L B 培養基,含 50jutg/m l 氨節青霉素 PvuI 限制性內切核酸酶及緩沖液 含有人類基因組 P2 微球蛋白基因的質粒(可向作者索取) 3m o l / L 乙酸鈉, p H 5. 2 1 0 0 % 乙醇 J558L 細 胞(可向作者索取) x/R P M I -10 完全培養基,含 l O m m o l / L H E P E S (完全 R P M I -10/H E P E S ) 10m g / m l G 418 (Life Technologies) 14°C 水浴 微量離心機, 4°C 25c m 2 培養瓶 Bio-Rad Gene Pulsei?(或與其相當的電穿孔儀)及用于真核細胞0.4cm間隙的電





 展 |