基 本 方 案 構 建 MHC I-Ig 二聚體
材 料
編碼目的 M H C I 類分子的 c D N A 及合適的引物
M Z w I 和 X k I 限制性內切核酸酶及緩沖液(N e w England Biolabs)
T A 克 隆 試 劑 盒(Invitrogen),可選
p X I g 質 粒(可向作者索取)
10X T 4 D N A 連接酶緩沖液,添 加 5m m o l / L A T P
I Weiss 單位/M1 的 T 4 D N A 連 接 酶(Life Technologies)
L B 平 板 ,含 50M g/m l 氨芐青霉素和 30M g/m l 卡那霉素
L B 培養基,含 50jutg/m l 氨節青霉素
PvuI 限制性內切核酸酶及緩沖液
含有人類基因組 P2 微球蛋白基因的質粒(可向作者索取)
3m o l / L 乙酸鈉, p H 5. 2
1 0 0 % 乙醇
J558L 細 胞(可向作者索取)
x/R P M I -10 完全培養基,含 l O m m o l / L H E P E S (完全 R P M I -10/H E P E S )
10m g / m l G 418 (Life Technologies)
14°C 水浴
微量離心機, 4°C
25c m 2 培養瓶
Bio-Rad Gene Pulsei?(或與其相當的電穿孔儀)及用于真核細胞0.4cm間隙