免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白D(IgD)的純化

基 本 方 案 1 用透析和凝膠過濾層析法純化 IgM

此 法 純 化 的 IgM 可達到較好純度，可用于酶解、異 硫 氰 酸 鹽 熒 光 素（FITC) 標記 、生物素標記或放射性標記。

材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)

腹 水 或 單 克 隆 抗 體（MAb) 上 清（單 元 1.4)

PBS

Sorvall離心機， SS-34型 轉 子（或類似轉子）

透析袋

26 mmX900 mm 層析柱，填有適當凝 膠 過 濾（SE) 樹 脂（CPI 附 錄 31)

1.單 元 L 5 離心和去除IgG中脂類物質的方法純化腹水上清，若 是 M Ab上 清 ，室溫或 4℃， 15 000g離心30min，去除細胞碎片，保留上清。

2.將澄清的腹水或MAb上清轉至透析袋中，在 4°C 下用≥1 0 倍樣品體積的蒸鎦水透析24 h，在室溫或4°C下將透析好的溶液以 15 000?20 OOOg 離 心 lh ，棄去上清。

3.將填有 SE 樹 脂 的 26 mmX900 mm層 析 柱 用 PBS 平 衡（CPI附 錄 31)，用≤5 mlPBS溶解步驟 2 中的沉淀并上樣，用 PBS 洗脫蛋白質并收集 100 個 組 分（1 % 柱體積）。

4.測 A₂₈₀。值 確 定 IgM 濃 度（表 1.5.1)。將含有純 IgM 的 洗 脫 液 合 并（第一個洗脫峰）。用 1 0 % SDS 還原聚丙烯酰胺凝膠鑒定 IgM 純 度（單 元 12. 3)。視使用的凝膠裝置而定上樣量，為 1?80ul。電泳上 IgM 顯示二條帶，在 78kDa 處 的 重 鏈 帶 和 25kDa 處的輕鏈帶。

5.溶于 PBS 中濃度為 1?20m g/m l 的 IgM 可 于 4°C 或 一 70°C (不能凍融）保 存 數 月 ，若 IgM 出現沉淀，可用更髙離子濃度的緩沖液再溶解（如 加入 NaCl)。