一、細胞和試劑的準備
1. 細胞樣品：來源淋巴細胞或外周血的白細胞。
2. 熒光標記單克隆抗體：常用的有FITC（fluorescein -isothiocyanate）和PE（phycoerythrin）標記的單克隆抗體。
3. 封閉抗體：抗Fc受體抗體
4. FACS緩沖液： 1×PBS 950 ml FCS 40 ml 10%疊氮鈉溶液 10 ml
5. 儀器緩沖液（FACS-flow）：儀器廠家提供
6. FACS清潔液（FACS clean ）和FACS洗凈液（FACS rinse）：儀器廠家提供。
二、操作步驟
1. 單細胞懸液的制備：將1×105~1×107的細胞放入1.5 m l離心管中3000 r/min 離心5分鐘，棄上清；加入FACS緩沖液100 μl 懸浮細胞。
2. 封閉細胞表面Fc受體：在步驟1中加入Fc受體抗體0.5 μl（0.5 mg/ml），水浴3分鐘。
3. 細胞與熒光抗體結合：在步驟2中加入熒光抗體1 μl（0.5 mg/ml），水浴30分鐘。
4. 洗細胞去除游離的熒光抗體：在步驟3中加入FACS緩沖液350 μl，輕輕混勻，3000 r/min，離心5分鐘，棄上清，重復步驟（4）2次。
5. 上樣前處理：取100 μl 儀器緩沖液加入步驟（4）獲得的細胞沉淀中，輕輕混勻懸浮細胞，將細胞懸液移入FACS專用管中，準備進行儀器檢測和分析。
三、儀器的操作
以FACSCaliburTM（BD Biosciences）儀器為例。儀器主要分為主機部分（包括激光激活源，射流，射線探測器）和計算機部分（CELLQuest softwere）。儀器的操作分為使用前的準備、使用中的操作和使用后的清洗。
1.使用前的準備
（1）打開電源：包括系統電源和主機部分電源。
（2）檢查供液槽和廢液槽：供液槽應含足夠的儀器緩沖液，廢液槽應在上次使用后清洗干凈。
（3）使機器處于負亞狀態，才能使細胞懸液被吸入至機器的吸管口。
（4）機器處于可應用狀態時，指示燈會變成綠色。
2.使用中的操作
（1）計算機部分—使用CELLQuest程序系統軟件：
①設定所要檢測細胞的數量：一般設10 000~20 000個細胞。
②命名本次實驗：一般含使用者的姓名和實驗日期。
③打開記數部分：顯示進入的細胞數以及檢測一定量的細胞所需要的時間。
④將微機與主機連接：控制檢測時的預檢測和實際檢測。
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