第一抗體的染色：
1、 將切片浸在3％H2O2甲醇溶液（新鮮配制）中10分鐘，PBS沖洗2分鐘×3次
2、 加100ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10分鐘，倒掉（不能沖洗）
3、 加入一抗（按照說明推薦濃度和孵育條件）
4、 使用含有0.05％吐溫20的PBS( TPBS)，沖洗2分鐘×3次
5、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（試劑2)，室溫孵育10分鐘
6、 使用含有0.05％吐溫20的PBS( TPBS)沖洗2分鐘×3次
7、 加入100ul（2滴）鏈霉親和素-AP（試劑3）的二抗，室溫孵育10分鐘
8、 使用含有0.05％吐溫20的PBS( TPBS)沖洗2分鐘×3次
9、 準備底物溶液：將1滴試劑4A和4B加入到1ml去離子水中，充分混勻；再加入1滴試劑4C，充分混勻
10、 加100ul（2滴）配好的AP底物溶液，室溫孵育（鏡下檢測孵育時間）
11、 使用含有0.05％吐溫20的去離子水沖洗終止反應
第二抗體的染色：
12、 加100ul（2滴）雙染增強劑（試劑7），孵育
13、 使用含有0.05％吐溫20的PBS( TPBS)，沖洗2分鐘×3次
14、 加100ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10分鐘，倒掉（不能沖洗）
15、 加入稀釋好的一抗（按照說明推薦濃度和孵育條件）
16、 使用含有0.05％吐溫20的PBS( TPBS)，沖洗2分鐘×3次
17、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（試劑2)，室溫孵育10分鐘
18、 使用含有0.05％吐溫20的PBS( TPBS)沖洗2分鐘×3次
19、 加入100ul（2滴）鏈霉親和素-HRP（試劑5）的二抗，室溫孵育10分鐘
20、 使用含有0.05％吐溫20的PBS( TPBS)沖洗2分鐘×3次
21、 準備底物溶液：將1滴試劑6A和6B加入到1ml去離子水中，充分混勻；再加入1滴試劑6C，充分
混勻：
22、 加100ul（2滴）配好的HRP底物溶液，室溫孵育（鏡下檢測孵育時間）
23、 使用含有0.05％吐溫20的去離子水沖洗終止反應