*組織凍結過程中，細胞內、外的水分會形成冰晶，凍結的速度愈慢，冰晶顆粒愈大，可嚴重影響組織、細胞的形態結構。因此制備凍塊時要求低溫、速凍。
1、冰凍組織塊的常用方法
*液氮中冰凍：組織投入液氮中 (一196?C)中10～20sec；
*干冰中加入丙酮(或異戊烷)，液體立即氣化起泡，溫度降至一70?C ，將組織投入，若在干冰丙酮中置一盛有異戊烷的容器，組織投入該容器內結凍則更好；
-上述組織在速凍時應浸埋于OCT包埋劑或甲基纖維素糊狀液內，以保護組織。
-制成凍塊后若需保存，應以鋁箔或塑料薄膜封包，貯存于-70 ?C冰箱。
2、切片
*供免疫組化用的冰凍切片同樣要求附貼平整，并有連續性。
*載玻片也應清潔無油污，但一般無需涂抹粘附劑；
*切片時，使用恒溫冷凍切片機，在箱內溫度-25 ?C 。切片厚度一般為4～8?m。
3、切片后處理
*切好的冰凍切片，室溫下自然晾干1～2h后，入4?C丙酮固定10min，待干燥后作免疫組化染色或封存于-20℃。
*冰凍切片由于切片技術要求較高，不易得到連續性很好的切片，其形態結構亦不如石蠟片，且凍塊和切片不便于長期貯存，因此冰凍切片的應用受限。
(三) 組織印片
*將潔凈載玻片輕壓于已暴露病灶的新鮮組織切面，細胞即粘附于玻片，晾干后浸入冷丙酮或醋酸-乙醇固定10min，自然干燥后染片或-20℃保存。
(四) 細胞培養片(細胞爬片)
*貼壁細胞培養時，置蓋片于培養瓶中，使細胞在蓋片上生長，達適當密度后取出固定(丙酮-20?C固定10～20min)，再進行免疫染色。
-蓋片的處理方法同載玻片的處理，但泡酸時間2h即可。
-為了防止細胞脫片，可用多聚賴氨酸處理。
(五) 細胞涂片
*大多數細胞涂片由細胞懸液制成，包括：
-血液、尿液、腦脊液；
-體腔積液；
-組織穿刺吸取，如骨髓、淋巴結或其他實質性組織
-懸浮培養的細胞或貼壁細胞經消化后形成的懸液。
(五) 細胞涂片 (續)
*細胞涂片的方法：
-手涂法
*將細胞濃度調節到106/ml左右，可直接涂于載玻片上，但要均勻、不重疊。
*圖片范圍應小于1cm直徑，以節約試劑。
-涂片機涂片法
*將細胞樣品制成2×105～6/ml 細胞懸液，吸取50～100?l (1～2×104～5cells) 加入涂片機內，1000rpm離心2min后細胞就均勻分布于玻片上。
三、免疫組化常用的染色方法
*根據標記物的不同分為
-(一) 免疫熒光法
-(二) 免疫酶標法
-(三) 親和組織化學法
(一) 免疫熒光法
【原理】