一．石蠟切片免疫組化染色實驗步驟： 1．石蠟切片脫蠟至水：（石蠟切片染色前應置60℃ 1 小時）。 （1）二甲苯I、II,各10 分鐘。 （2）梯度酒精：100%，2 分鐘? 95%，2 分鐘? 80%，2 分鐘? 70%2 分鐘。 （3）蒸餾水洗：5 分鐘，2 次（置于搖床）。 2．過氧化氫封閉內源性過氧化物酶：3%H2O2，室溫10 分鐘（避光）。 3．蒸餾水洗：5 分鐘，2 次（置于搖床）。 4．抗原修復： 根據待檢測的抗原，選擇適當的方法。 附：抗原修復液（10mM pH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液）的配制 （1）儲備液的配制： A 液：枸櫞酸三鈉-2H2O 29.41g + 蒸餾水1000ml B 液：枸櫞酸21g + 蒸餾水1000ml （2）工作液的配制：A 液82ml + B 液18ml + 蒸餾水900ml 抗原修復的方法： （1）高壓鍋處理技術：枸櫞酸鈉緩沖液（10mM，PH6.0）,淹沒切片,蓋上鍋蓋，高壓鍋內煮沸,上汽3 分鐘后緩慢冷卻（可用自來水在高壓鍋外沖，以助冷卻）。 （2）微波處理技術:用塑料切片架,置于塑料或耐溫玻璃容器內，枸櫞酸鈉緩沖液淹沒切片，選擇中高或高檔,5 分鐘;取出并補充已預熱的枸櫞酸鈉緩沖液；再選擇中高或高檔,5 分鐘（. 最佳溫度為92～95℃） （3）酶消化處理：此略。 抗原修復的注意事項： （1）組織不能干。 （2）選擇抗原修復方法要因抗體而異。 （3）該方法主要用于10%福爾馬林固定、石蠟包埋組織。 （4）抗原修復后至DAB 顯色的過程中，均需用PBS 緩沖液。 5．PBS：5 分鐘，2 次（置于搖床）。 6．正常血清封閉：從染片缸中取出切片，擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分（保持組織呈濕潤狀態）,滴加正常山羊或兔血清（與第二抗體同源動物血清）處理，37℃，15 分鐘。 展開 | 