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  • 發布時間:2019-10-02 21:34 原文鏈接: 免疫組織(細胞)化學與定量分析(1)

    如何獲取與組織細胞功能相關的各種定量測量信息是免疫組織(細胞)化學的一大難題。制作免疫組織(細胞)化學標本環節較多,只要有一個環節失誤就會影響實驗結果,除了需要精制的藥品外,還需要熟練的技術。那么,做成理想的標本后,如何進行觀察才能獲得盡量多的的各種定量信息,而且使這些信息能較客觀的反映出來,這就是本文的寫作目的。

    一、定量分析的重要性

    目前有許多研究免疫組織(細胞)化學的文章,是做定性和定位研究的。如有文獻中提到,P物質在腦組織中存在于30處以上,這只是解決了定性定位問題,這些部位含P物質的量是否相同?可否用快速簡便的方法對細胞內免疫反應產物的量進行分析?從而可進行比較。所謂反應產物的“量”包括顏色深淺,其所占的長度或面積等,就要借助于圖像分析儀(image analyzer)了。

    以往我們對免疫細胞化學或一般組織化學光鏡標本的觀察,對反應產物的量常用“+”號表示,一般可分為0~+++,共五個等級,這種方法對差別較大的標本當然還是可以用的。

    但存在以下三方面的問題:①同一張標本,不同的觀察者可以得到出不同的結論,因為這種分級沒有明確的客觀標準;②即使同一張標本同一個觀察者,間隔若干天后進行再次觀察時,可能結論也不一樣的;③最后一點也是最重要的一點,人的視覺是有一定限制的,用一般觀察法實際上已經丟失掉了許多可貴的信息,因為你察覺不到實際上存在的較小的差異。

    因此我們力求有一個客觀的比較精密的標準。除了常用的儀器如顯微分光光度計(microspectrophotometer)和顯微密度計(microdensitometer)等以外,還可用圖像分析儀進行測量。

    前二者已有許多有關著作中介紹過,就其精確與靈敏來說都是夠的,但卻不能同時測出標本中某些成分的面積、體積或長度等其他極有用的參數。圖像分析儀的分析廣度則要大得多,并能明顯地提高工作效率,所得到的各種數據可通過分析儀上的計算機進行統計學處理,只要將各種統計學公式輸入計算機,選擇其中你所采用的公式,即可快速得出分析結果,告訴你有無顯著性差異。

    二、圖像分析儀簡介

    圖像分析儀又稱圖像分析系統(image analysis system),主要用來解決如何客觀地較精確地用數字來表達存在于標本中的各種信息,可稱為數學形態學。它已經成為一種公認的科學研究工具,并且逐漸展現出巨大的潛能。圖像中包含著極其豐富的內容,是人們從客觀世界中獲得信息的重要手段,因此,正確地測量和處理圖像已成為測量技術中的重要課題,并廣泛應用于航空遙感測量、金屬圖像測量、微電子技術中微圖形檢測、精密機件尺寸檢測,光波干涉圖、醫學生物學的研究及應用等有關領域中。圖像測量將會隨著信息科學和人工智能的發展而日益顯示其重要作用。現代圖像測量是光學、電子學、計算機技術等相互滲透的跨學科的結果,涉及廣泛的學科領域,醫學只是其中一個分支。

    我們在光學顯微鏡下看到的是光學圖像,而在圖像分析儀屏幕上看到的是電子圖像,因此在顯微圖像分析中,整個系統最重要最關鍵的工作就是要保證得到的電子圖像能最精確地反映出光學圖像,這個過程由攝像機(圖像掃描器)、顯像管和圖像處理機(計算機)來完成。圖像可通過光學顯微鏡、透射電鏡或掃描電鏡傳到攝像機而產生電信號,照片或膠卷上的圖像也可以通過攝像機反映到電視屏幕上進行分析。

    圖像在電視屏幕上是由許多像素(pixel)構成的,單位面積屏幕上像素愈多則圖像愈清晰,即分辨率愈高。各廠家生產各種不同規格的產品,如有640×480像素的、896×704像素的、512×480像素的屏幕等。當圖像顯示時,每個像素含有兩方面的信息,即此像素的灰度及其在標本中的位置,兩種信息決定了圖像的形狀和顏色深淺。

    有關圖像分析的學術活動,1963年召開了第一屆國際討論會,此后每四年有一次國際學術交流活動。1983年在美國召開了第六屆國際學術會議,與會代表約150人。1987年9月在法國召開了第七屆學術會議,在200多正式代表中有2/3是生物醫學方面的專家,而我國生物醫學界沒有人被邀參加,可見我國過去對如何將圖像分析應用于醫學生物學方面的研究重視得不夠,對國際上這方面的信息掌握得不及時。國內自70年代末期相繼從國外引進大型自動圖像分析儀后,80年代才開始將醫學生物學研究與圖像分析方法結合起來。

    從1981~1983年召開了三次全國體視學與圖像圖像分析學術會議,1987年召開了第四次學術會議,雖然在宣讀的論文中醫學研究已占了很大的比例,但具體應用到免疫細胞化學則實例極少,僅是一個開端。1988年中國體視學會正式成立,是在民政部登記的屬于新學科的第一個學會。

    并于1991年11月在重慶第三軍大學召開了“全國計量學在形態學研究中應用研討會”,與會代表來自22個省市,形態計量學的方法已應用到組織學、解剖學、病理學、細胞學等領域。更為可喜的是過去此類研討會都是請外商到會介紹他們的產品,為他們提供中國市場,而此次會議上本國的三家研制生產圖像分析儀的單位在大會上介紹各自的產品,以較好的性能價格比與國外產品競爭,擴大國內市場,我國在此領域的研究進展也是很快的。


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